春节标语范文

引言：寻求写作上的突破？我们特意为您精选了12篇春节标语范文，希望这些范文能够成为您写作时的参考，帮助您的文章更加丰富和深入。

篇1

2、抢抓新机遇，增创新优势，再创新辉煌。

3、梅为小院添春*。

4、世上今逢万里潮。

5、鹊向龙年报好音。

6、龙萦华表冲霄汉。

7、一点公心秋月明。

8、梅为春意赋新意。

9、户栽花树户生辉。

10、牢固确立科学发展观，在科学发展中率先发展。

11、人寿年丰喜事多。

12、神驹腾跃吉祥年。

13、梅花香遍神州地。

14、坚持科学执政、民主执政、依法执政，全力构建和谐社会。

15、山青水秀风光好。

16、庆佳节，创新业，夺取全市改革开放和现代化建设新胜利。

17、祝您新年快乐，身体安康，笑口常开！一元复始，旦复旦兮！

18、庆祝春节，欢度新年。

19、龙兴阳动乾坤晓。

20、春到碧桃树上。

21、满怀生意春风蔼。

22、春草满庭吐秀。

23、龙步震开盛纪春。

24、雪向龙年报丰年。

25、春满人间民泰安。

26、笛弄梅花曲。

27、华人欢度万荣春。

28、龙族喜迎千禧岁。

29、瑞雪兆丰年。()

30、莺歌绿柳楼前。

31、政协人和天地春。

32、跨越江河架宏桥。

33、东风迎新岁。

34、兔降葡旗别澳门。

35、龙游沧海江湖小。

36、龙腾云海国昌盛。

37、狮醒神州世界惊。

38、莺啼杨柳风。

39、削平山岭铺大道。

40、百花遍地飘香。

41、洞庭自有千重浪。

42、张灯结彩迎新年，齐心协力谱新篇。

43、深入贯彻落实科学发展观，实现三个文明建设协调发展。

篇2

生产再忙，安全不忘，人命关天，安全在先。

工作为了生活好，安全为了活到老。

防火人人想，户户都安详

人人知防火，户户齐欢乐

消防时时在，安全传万代

消防进家园，平安到永远

创业千日难，火烧一日光

火起于幽微，灾缘于疏忽

火灾似猛虎，防患于未燃

客户是上帝，质量是生命，地球是市场，安全是保障

工作时间注意安全，亲人等你回家团圆

生产靠安全保驾

生命靠安全护航

安全意识在我心中，安全生产在我手中

人生就像一场戏，没有安全就没戏

没有主人翁精神，可悲;没有安全意识，可恨

感情深，一口闷，酒后上班头发昏;

上班之前不喝酒，互相提醒够朋友

筑安全长城，兴白云经济

安全警钟时常鸣，防范打锣经常敲

安全管理扣扣相连，生产效益节节攀高

分分秒秒珍惜生命，时时刻刻重视安全

居安思危年年乐，警钟长鸣岁岁欢

安全意识“得过且过”;危险隐患“得寸进尺”

安居乐业家兴旺,全力以赴厂繁荣

危火、危电、危操作，无危不在;细心、小心、责任心，齐心以待

加强治安防范，减少违法犯罪。

门窗要牢固，外出、夜间要锁牢。

冬季防范很重要，报警监控需安牢。

防盗门窗不可少，财物如何会被盗。

妇女出门忌提包，物品饰品少为妙。

结伴同行很必要，防抢意识要提高。

车辆最好安防盗，办事购物车存好。

勿认办事用时短，被盗也就几十秒。

闲来无事莫闲逛，人多繁杂易失盗。

晚上出门勿远走，盗夺大多在夜间。

民警建议搞联防，联防防盗效果好。

居民自发来巡逻，民警指导很重要。

邻里关系要处好，加强治安搞联保。

架起警民联系桥，打造治安防控网。

邻居间团结和睦，治安防范靠大家。

门窗加固最要紧，焊接安装要牢固。

社会治安社会治，综合治理综合管。

因地制宜抓防范，整合力量保平安。

贵重礼品要放好，防盗措施最重要。

篇3

3. 维护社会公德，遵守职业道德，弘扬家庭美德

4. 挥手告别陋习，并肩走向文明

5. 美德重在养成，文明贵在行动

6. 事事处处营造和谐，点点滴滴展示文明

7. 春天从绿树开始，文明从呵护起步

8. 一滴水能折射阳光，细微处显露您的品格

9. 开明开放诚朴诚信博爱博雅创业创新

10. 只言片语体现修养，小事细节彰显文明

11. 加强邻里和睦团结，营造和谐人际关系。

12. 文明创建人人参与，和谐社会家家受益。

13. 家家争做文明家庭，人人参与创建活动。

14. 破除陈规陋习，倡导文明新风

15. 倡导文明新风,共建美好家园。

16. 人人参与创建,共享文明成果。

17. 建设和谐文化,培育文明风尚。

18. 参与志愿服务,弘扬中华美德。

19. 遵守社会公德,争当文明市民。

20. 追求和谐,创建和谐,共享和谐。

21. 文明规范伴我行,争当文明好市民。

22. 一言一行总关情,携手共创文明城。

23. 凝聚智慧谋发展,汇集力量促和谐。

24. 讲文明讲卫生讲科学树新风。

25. 一言一行树形象,一举一动见文明。

26. 人民城市人民管，管好城市为人民。

27. 共创共建共分享,更优更美更文明。

28. 加强三德教育，创建和谐社区。

29. 讲究社会公德，爱护公共设施。

30. 增强文明意识，提高自身素质。

31. 建设生态文明，改善生态环境。

32. 遵守社会公德，营造文明氛围。

33. 改善城市环境，同享社会和谐。

34. 增强公德意识，养成文明习惯。

35. 家家争做文明家庭,人人参与创建活动。

36. 创建文明安全社区,改善市民安居环境。

37. 从自身做起，从细节做起，共创文明小区。

38. 创文明小区,建美好家园,营造优美生活环境。

39. 创造优美环境,营造优良秩序,塑造文明小区。

40. 树立道德风范,做好文明示范,争当先进模范。

41. 爱国守法明礼诚信团结友善勤俭自强敬业奉献。

42. 文明礼貌助人为乐爱护公物保护环境遵纪守法。

43. 爱岗敬业诚实守信办事公道服务群众奉献社会。

44. 尊老爱女平等夫妻和睦勤俭持家邻里团结。

45. 争做社会好公民,争做单位好员工,争做家庭好成员。

46. 你出力，我出力，共建文明社区齐努力。

47. 举全区之力,集全区之智,争创文明城区。

篇4

3. 龙腾云海国昌盛。

4. 抢抓新机遇，增创新优势，再创新辉煌。

5. 莺啼杨柳风。

6.春雨洒来万象新。

7. 百花遍地飘香。

8. 洞庭自有千重浪。

9. 新年新气象 来年更辉煌

10.龙萦华表冲霄汉。

11. 梅为小院添春*。

12. 世上今逢万里潮。

13. 鹊向龙年报好音。

14. 新年伊始，向各行各业的建设者致敬

15. 一点公心秋月明。

16. 梅为春意赋新意。

17. 建设文明和谐新丰谷，再创丰谷新辉煌!

18. 度盛世春节，共鉴美满春节 恭祝全体人民节日愉快，万事如意

19. 辞旧迎新 来年更上一层

20. 过欢乐春节 文明春节 做文明市民

21. 以我文明新貌，共庆新春佳节

22. 张灯结彩欢度佳节，齐心协力共创伟业

23. 张灯结彩迎新年，齐心协力谱新篇

24. 求真务实抓转型 全心全力搞跨越

25. 春草满庭吐秀。

26. 恭祝全体员工及家属新春快乐、阖家幸福!

27. xx(单位名称)祝全市人民新春快乐平安吉祥阖家幸福万事如意!

28. 庆祝春节，欢度新年。

29. 户栽花树户生辉。

30. 春到碧桃树上。

31. 满怀生意春风蔼。

32. 削平山岭铺大道。

篇5

3、366——取尾数顺顺利利的寓意。

4、400——寓意四季如意。

5、600、666——代表顺顺利利。

6、800、888——数字8向来被视为吉利数字，谐音“发”，意寓发财，顺利。

7、1666——人生一路顺风如意，寓意新人今后的路会一帆风顺，吉祥如意。

篇6

微信春节福袋是不能无限领取，但你按照关键词触发彩蛋特效的时候，并不是每一个特效都会有菜单，特别是你领取了很多奖励后，系统就不会再给你弹出福袋了，不存在无限领取的说法。

2022微信春节表情雨为什么没福袋

微信版本太低，需要更新。

活动仅支持微信iOS客户端版本8.0.18和Android客户端版本8.0.19参与。（请你理解，因技术客观对手机版本有要求，所以部分用户可能无法参与该活动，请你升级到相应的版本来参与活动 ）

2022微信春节福袋是有限制吗

篇7

信用户通过在私信/群会话中输入“虎年大吉”、“虎虎生威”、“如虎添翼”、“新年快乐”、“新春快乐”、“恭贺新春”、“恭喜发财”、“财源滚滚”任一关键词即可触发彩蛋特效，同时随机会掉落福袋，点击福袋将有机会免费领取礼品。

2202微信春节福袋最多能领几次

并没有设置次数，但是有网友表示玩了几次领了几次东西后，就再也收不到福袋的弹窗了。

这个是对于游戏福利，你可能有机会多次领取王者荣耀的道具福利，但每款道具福利你只有机会领取一次

同一个微信帐号参与活动次数不做限制，但不得使用作弊软件、外挂程序或其他违反法律法规、平台规则的手段参与。

篇8

高三12班 王靓

各位老师，各位同学，大家上午好，我是来自高三十二班的王靓。今天为大家国旗下讲话的主题是：与青春结伴，与成长同行。

2013年的盛夏，我们怀揣着对新生活的忐忑，和对未来的憧憬，走进了二高。随后的生活，按部就班。

绿茵场上，同学们气壮山河的呐喊声；画室里，那每一声水粉笔敲打在水桶上的乐章；人声鼎沸的食堂里，同学们大朵快颐的欢声笑语；校运会的跑道上，一马当先的矫健身影等等，这一切的一切如在昨天。

然而谁的年少不迷茫，谁的青春不叛逆。课堂上，我们也曾偷偷往嘴巴里塞零食、与周公会晤、同桌间窃窃私语等等，做了很多现在想来都觉得幼稚又可笑的事情。

生活总在变化中不断前行，我们也在时间的洪流中渐渐体谅老师的无私、父母的辛劳、同学的友爱。我们在一次次打击或成就中找到了自己的价值，在师友的劝诫与自我的觉醒中一点点地担负起了我们应尽的责任。

我们对未来有无限的遐想与展望，我们的生活因一个个鲜活的梦想而熠熠生辉。我们也因为肩上担负的对自己与他人的责任而变得稳重，收敛起轻狂无知，走向懂事成熟。

回顾我们的学习生活，脑海中闪现的是艰辛与压力。这三年里，我们都是穿越清晨的薄雾，打着哈欠到校；顶着静寂的路灯，身心疲惫地赶回家。很多时候，我们会感到身心疲惫，甚至觉得自己被束缚。面对学习，我们都曾焦虑、失眠、痛哭……一次次想要放弃，但是我们都坚持到了今天。

我们可能被毁灭，却不能被打败。年轻的我们，对梦想征途上付出的一切汗水与艰辛，将无怨无悔。 随着时间的推移，我们经历的故事，总有一天成为昨天的传说。但是，我们不后悔，因为这才是真正成长的节奏。

高考不仅是高中学习生活的检测，更是青少年人生中最重要的一次青春盛典。屈复有诗云：百金买骏马，千金买美人，万金买高爵，何处买青春？

篇9

一是继续开展基层农技人员素质提升培训。省里继续依托现代农业技术培训基地集中培训骨干农技人员1000名，各县市自行组织培训基层农技人员共2000人以上。

二是重点组织骨干专业农民培训。在职业技能培训方面，结合农村劳动力培训阳光工程项目，主要针对农业和农村服务业所需人才开展技能培训；在新型职业农民试点培训方面，将在辉南、东辽、德惠、前郭、双辽等5个县（市）率先实施新型职业农民培训试点。同时还将开展具有地方特色农业产业技术培训，重点培训人参、中药材、食用菌、山野菜种植与加工、梅花鹿、林蛙养殖与加工等从业人员。

篇10

【Abstract】 AIM: To obtain Rv2450 gene segments of Mycobacterium tuberculosis (Mtb)， express them efficiently in E.coli and purify the aim proteins. METHODS: Rv2450 gene segments were amplified by PCR with specific primers from genome of Mtb H37Rv strain. After sequenced， Rv2450 gene segments were subcloned into expression vector pProEX HT and purified in E.coli DH5α. Recombinant 6×His fused proteins were purified via NiNTA purification system. RESULTS: The length of PCR products was 529 bp and identical with what the GenBank reported. SDSPAGE analysis showed that the fusion protein mainly existed in inclusion bodies. We isolated the inclusion bodies from the culture and purified the fusion protein under denaturing condition using metal chelate affinity chromatography. CONCLUSION: The construction of the recombinant expressing plasmid lays a basis for further study of Rv2450 protein.

【Keywords】 Mycobacterium tuberculosis; cloning; expression; purification

【摘要】 目的：克隆结核分枝杆菌（Mtb）Rv2450基因，序列测定正确后进行融合表达、纯化. 方法：采用聚合酶链反应（PCR）从Mtb H37Rv基因组中扩增出Rv2450编码基因，序列测定正确后，亚克隆到融合表达载体pProEX HT中，转化大肠杆菌DH5α，目的基因经IPTG诱导，由T7启动子调控表达带6个组氨酸残基的Rv2450蛋白，在变性条件下对目的蛋白进行亲和层析纯化. 结果：得到融合6个组氨酸残基的Rv2450蛋白纯度大于90%. 结论：构建了Mtb Rv2450基因的重组表达载体，并获得了高纯度的融合表达蛋白.

【关键词】 结核分枝杆菌；克隆；表达；纯化

0引言

近年来，结核病的发病率迅速回升，成为世界性的问题. 目前，全世界约有1/3的人感染，每年约800万的新发病例和300万的患者死亡，因而寻找更有效的替代卡介苗的疫苗已成为当务之急. Rv2450蛋白是结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis， Mtb) RPF蛋白家族的一员，序列分析发现，它不仅与细菌的增殖有关，还有可能是宿主免疫系统识别的一个靶抗原［1］. 因此我们克隆表达并纯化Rv2450蛋白，以期进一步研究其免疫特性，评价其是否可作为候选结核亚单位疫苗的组分.

1材料和方法

1．1材料

7H9液体培养基购自Difco公司；Mtb H37Rv株为陕西省结核病防治研究所惠赠；Taq DNA聚合酶，dNTPs，T4连接酶，HindⅢ，BamHⅠ及DNA电泳胶1回收试剂盒、pGEM Teasy质粒购自Promega公司； E.coli DH5α和pProEX HT质粒为本室保存；金属鳌合亲和层析介质（NiNTA）购自Qiagen公司.

1．2方法

Mtb Rv2450全基因序列的特异性引物序列为：P1：5′GCGGATCCAAGAACGCCCGTACGACG3′，含BamHⅠ酶切位点；P2：5′GCAAGCTTTGCGTCTTTTCGCGGTGG3′，含HindⅢ酶切位点和终止码. 均由西安隆恩公司合成. 取少量Mtb　H37Rv株接种于7H9液体培养基中，37℃培养2 wk. 取5 mL液体培养物以9000 g离心10 min，将沉淀重悬于50 μL裂解液（10×PCR缓冲液5 μL，45 g/L吐温20 5 μL，45 g/L NP40 5 μL，20 g/L蛋白酶K 0.5 μL及水34.5 μL）中，置于55℃水浴1 h，95℃水浴10 min使蛋白酶K灭活，再以9000 g离心1 min，取上清，用酚氯仿抽提，无水乙醇沉淀，溶于20 μL水中备用. 以Mtb H37Rv基因组为模板，以P1和P2为引物做PCR，经30个循环后，用PCR产物清洁试剂盒回收PCR产物. 然后将其与pGEM Teasy载体按3∶1的比例混合，用T4连接酶连接，转化用CaCl2低温制备的E.coli DH5α感受态细胞. 然后涂布于LB平板（含氨苄青霉素100 mg/L），以蓝白法随机筛选6个白色菌落，分别接种于5 mL含氨苄青霉素的LB培养液中，37℃振荡培养过夜，碱裂解法提取质粒DNA. 将提取的质粒DNA用HindⅢ和BamHⅠ双酶切，37℃ 2 h，进行10 g/L的琼脂糖凝胶电泳，以DL2000为分子大小参照，观察有无约529 bp大小的片段，然后随机挑取2个克隆进行测序. 碱裂解法提取pGEM Teasy重组克隆质粒，用HindⅢ和BamHⅠ双酶切，经10 g/L琼脂糖凝胶电泳，回收目的基因条带，溶于20 μL水中. 取目的片段和同样用HindⅢ和BamHⅠ双酶切的pProEX HT质粒以1∶1的比例混合，用T4连接酶连接，转化用CaCl2低温制备的E.coli DH5α感受态细胞. 然后涂布于LB平板（含氨苄青霉素100 mg/L），37℃培养过夜. 随机挑取6个菌落，分别接种于5 mL含氨苄青霉素的LB培养液中，37℃振荡培养过夜. 各取3 mL碱裂解法提取质粒DNA，再以HindⅢ和BamHⅠ双酶切鉴定，挑选阳性克隆. 将4个阳性克隆分别接种于5 mL含氨苄青霉素的LB培养液中，37℃振荡培养18 h，分别取50 μL加到5 mL含氨苄青霉素的LB培养液中，37℃振荡培养2~3 h，IPTG诱导4 h，进行120 g/L SDSPAGE，并通过凝胶薄层扫描测定其表达量.

将所构建的重组菌pProEX HT2450在选择LB培养液中37℃振荡培养18 h，取50 μL加到5 mL选择LB培养液中37℃振荡培养2~3 h ，1 mmol IPTG诱导4 h，进行120 g/L SDSPAGE，并转移至硝酸纤维素膜上，用10 g/L BSA封闭过夜，加抗组氨酸的特异性mAb作用1 h，以10 mmol/L PBS（pH 7.2）洗涤后，加HRP标记的羊抗鼠IgG作用1 h，以DAB显色观察表达产物. 将制备好的包涵体重悬于20 mL缓冲液A中，室温搅拌2 h，使包涵体完全溶解，10 000 g离心30 min后，将上清液加入到用缓冲液A平衡过的NiNTA agarose柱上，然后分别用5倍柱床体积的缓冲液B，10倍柱床体积的缓冲液C，2倍柱床体积缓冲液D，2倍柱床体积缓冲液E洗柱，最后用10 mL缓冲液F对目的蛋白进行洗脱，分步收集，每管约1 mL. 取各管收集液15 μL，加入等量2×上样缓冲液，37℃温育10 min，经120 g/L SDSPAGE检测，将含有目的蛋白的各管合并，在变性条件下纯化融合Rv2450蛋白［2］. 采取逐步降低尿素浓度的方法，除去蛋白溶液中的尿素，使变性的蛋白在此过程中自然复性，先用含6 mol/L尿素的缓冲液4℃透析过夜，然后分别用4， 3， 2， 1和0.5 mol/L尿素的梯度透析各4 h以上，最后用PBS缓冲液再透析4 h以上. 透析结束后，将蛋白溶液在4℃下10 000 g离心10 min，上清即为可溶的复性蛋白，将其分装后冻干备用.

2结果

2．1Rv2450基因的扩增、克隆及序列分析应用上述合成的两种引物，以分支杆菌H37Rv基因组为模板，扩增Rv2450的基因序列，取PCR产物5 μL，10 g/L琼脂糖电泳，电泳结果显示（Fig 1），PCR扩增产物约为529 bp的片段. 将PCR扩增产物克隆于pGEM Teasy中，挑选经酶切鉴定正确的克隆，经正反向全自动序列分析，所得序列结果与GenBank公布的序列完全相同.

2．2Rv2450基因表达载体的鉴定将纯化的重组质粒pGEM Teasy用HindⅢ和BamHⅠ双酶切，回收529 bp产物，与用相同酶切的pProEX HT质粒连接，转化E.coli DH5α感受态细胞，然后在选择平板上随机挑选3个克隆，提取质粒用HindⅢ和BamHⅠ双酶切，有2个克隆切出529 bp的片段，将1号阳性克隆命名为pProEX HT2450（Fig 2）.

2．3重组质粒的表达及其产物的鉴定将重组质粒pProEX HT2450转化E.coli DH5α感受态细胞，1 mmol IPTG诱导4 h，进行120 g/L SDSPAGE，发现约在Mr为22 000处有1条蛋白带，同预计的大小相吻合（Fig 3）. 经凝胶薄层扫描，测得重组菌表达带的蛋白量约占菌体总蛋白量的24%. 对表达蛋白的可溶性分析证明，融合表达产物主要以不可溶的包涵体形式存在（Fig 4）. 将表达蛋白与抗组氨酸的特异性mAb做免疫印迹，发现在Mr 22 000处表达有一条带，表明此表达产物含有能与抗组氨酸的特异性mAb相结合的表位（Fig 5）.

2．4表达蛋白的亲和层析纯化从重组菌中制备的包涵体经洗涤后，用8 mol/L尿素变性，上到NiNTA金属鳌合亲和层析柱上，由于pProEX HT质粒多克隆酶切位点上游插入编码6个连续组氨酸残基的序列（6×His tag），在重组质粒进行诱导表达时，6×His tag与外源插入片段共同表达，因而融合蛋白带有6×His tag，后者可与金属镍发生鳌合，从而使目的蛋白在流经柱床时被特异性吸附，再利用咪唑置换，洗脱下特异性结合的蛋白. 120 g/L SDSPAGE证明了这种方法的有效性（Fig 6），经薄层扫描分析融合蛋白纯度可达90%以上. 将分步收集液中含目的蛋白的各管合并，缓慢、逐步降低透析液中尿素的浓度，使变性的蛋白在此过程中自然复性，复性后的目的蛋白经冻干保存，以便于进一步的研究工作.

3讨论

Micrococcus luteus可分泌一种复活促进因子（resuscitationpromoting factor， Rpf）以刺激该菌休眠体复活和生长，促进繁殖体生长，与真核细胞的细胞因子相似，具有自我刺激作用，所以又称细菌因子. 该因子也可以刺激其他种类的高G+C%革兰阳性菌，包括Mtb［3］. Mtb全基因序列分析表明，其中Rv2450c，Rv0867c，Rv1009，Rv2389c和Rv1884c基因与Micrococcus luteus菌Rpf基因同源，其中4个基因编码的蛋白是分泌蛋白，推测结核杆菌这些基因编码的蛋白可能也具有Rpf作用，但尚无直接证据［4］. 巨噬细胞内Mtb的分离培养时发现，巨噬细胞内Mtb由于菌体受到损伤或处于休眠状态，而在体外生长困难，所测的单位体积内细菌形成单位明显低于实际细菌密度，当加入Micrococcus luteus菌的Rpf后，可促进受损伤菌体或处于休眠状态的菌体复苏和生长，生长数量明显增加，敏感度增高［5］. 对Mtb的Rpf样蛋白家族功能研究将有助于结核病复发感染的控制，还可以探讨Rpf样蛋白在体外刺激Mtb的复苏和生长作用，使用Rpf建立Mtb快速、敏感的培养方法，改进临床检验上常规结核杆菌的分离培养和药物敏感实验方法，缩短所需时间，提高检验的敏感度；同时我们还可以探讨Rpf样蛋白可否刺激机体产生相对应的中和抗体，阻断Rpf样蛋白对Mtb的作用，是否可以做为预防和治疗Mtb感染的疫苗. 我们利用融合表达载体pProEX HT表达了氨基端带有6个组氨酸残基的Rv2450，该蛋白以包涵体的形式存在，在变性条件下，利用金属鳌合亲和层析对目的蛋白进行了纯化，并利用缓慢透析的方法使部分目的蛋白得到了复性.

参考文献

［1］ Vladimir V， Yeremee V， Tatiana K， et al. Protein of the Rpf family: Immune cell reactivity and vaccination efficacy against tuberculosis in mice ［J］. Infect Immun， 2003;71(8):4789-4794.

［2］ 杨敏，刘新平，韩炯，等. 乙型肝炎病毒Pres基因的克隆表达及亲和层析纯化［J］. 第四军医大学学报，2001；22（16）：1493-1496.

Yang M， Liu XP， Han J， et al. Cloning and fusion expression of HBVPres gene and its purification using affinity chromatography［J］. J Fourth Mil Med Univ， 2001;22(6):1493-1496.

篇11

[中图分类号] R587.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）02（b）-0019-03

糖尿病常分为1型与2型，其中2型糖尿病较易引起各类并发症，如视网膜病变、神经病变、酮症酸中毒及肝损伤等，其中肝损伤较为凶险，且肝损伤与糖尿病互相影响形成恶性循环，糖尿病导致糖、脂代谢紊乱，进而引起糖原和脂质在肝细胞堆积及肝微血管病变，其中以脂肪肝和肝硬化较为常见[1]。本文为了探讨2型糖尿病伴肝损伤的临床诊断指标，将2型糖尿病伴肝损伤大鼠作为研究对象，观察肝损害与SREBP-1c、JNK蛋白表达水平之间的相关性[2-3]。

1 材料与方法

1.1 试验动物

健康清洁级SD大鼠60只，雌雄各半，大鼠血糖平均值为（4.41±0.59）mmol/L，平均（4.6±0.2）周龄，平均体重（86.7±5.2）g；所有大鼠试验前均饲以普通饲料，单笼喂养，自由摄食摄水。将60只SD大鼠随机分为模型组和对照组，模型组40只，对照组20只。

1.2 制备动物模型

参照相关2型糖尿病大鼠造模方法，模型组大鼠给予高脂饮食，对照组给予普通饮食，均饲养4周。模型组大鼠形成肥胖性胰岛素抵抗状态，禁食12 h，用pH= 4的1 mmol/L无菌PBS缓冲液将STZ配制成1%溶液，按30 mg/kg的剂量腹腔注射2次/d，共注射2 d，注射完成后再禁食12 h，两组大鼠继续饲养2周。2型糖尿病大鼠模型是否建立成功，以空腹血糖≥ 9 mmol/L确定，伴肝损伤大鼠模型建立以检测肝功能指标确定。本文造模结束时共得到2型糖尿病大鼠32只，2型糖尿病伴肝损伤大鼠25只。两组大鼠乙醚麻醉后眼静脉丛取血，测定血糖、血胰岛素、血三酰甘油、胆固醇及肝功能指标[4]，处死后取出肝脏置于10%甲醛溶液中固定，制作石蜡切片[5]。

1.3 SREBP-1c与JNK检测

采用免疫组织化学法检测SREBP-1c蛋白表达，以PBS作阴性对照，大鼠肝组织石蜡切片常规脱蜡至水后置于2%过氧化氢甲醇溶液中，37℃孵育20 min，滴加一抗和二抗4℃过夜，室温孵育30 min后显色；检测结果以阳性面积和染色深度计算阳性积分吸光度值。检测JNK蛋白表达采用免疫组化染色方法，对照组和模型组大鼠肝组织进行免疫组化染色[6]，按照试剂盒要求操作，以PBS为阴性对照，根据染色强度和阳性细胞百分比综合评价JNK阳性百分表达率。

1.4 血生化指标检测

两组大鼠均以10%水合氯醛（3 mL/kg）腹腔注射麻醉大鼠，下腔静脉取血5 mL加入肝素抗凝管内，室温下待自然凝固后以1 500 r/min离心15 min后，分离血清后于-30℃低温保存备用。血清葡萄糖水平检测中血清葡萄糖（GLU）检测采用己糖激酶法（HK），血清胰岛素（INS）检测采用酶联免疫法（EIA），HK试剂盒与双抗体夹心酶联免疫吸附实验试剂盒均购自上海研谨生物科技有限公司；血脂检测中血三酰甘油（TG）试剂盒、游离脂肪酸（FFAs）试剂盒、低密度脂蛋白胆固醇（LDL）试剂盒、高密度脂蛋白胆固醇（HDL）试剂盒、总胆固醇（TC）试剂盒均购自厦门慧嘉生物科技有限公司，以上血脂水平检测均采用酶比色法测定；肝功能检测中丙氨酸氨基转移酶（ALT）试剂盒、门冬氨酸氨基转移酶（AST）试剂盒、总胆红素（TBiL）试剂盒、白蛋白（Alb）试剂盒、透明质酸酶（HA）试剂盒和层黏蛋白（LN）试剂盒购自湖南永和阳光科技有限责任公司，其中ALT、AST检测采用酶速率法，TBiL、Alb、HA及LN检测采用重氮终点法；以上各项生化指标检测均采用BT-2245全自动生化分析仪进行检测。

1.5 统计学方法

将各检测资料建立数据库，所有数据采用SPSS 13.0统计学软件进行统计分析，以均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血糖及血脂水平对比

两组大鼠的血糖和血脂水平从表1中可见，模型组体重、肝重及肝重占体重比例明显大于对照组；模型组血糖及血脂水平也显著高于对照组，两组间差异有统计学意义（P < 0.05），说明模型组大鼠具有明显的2型糖尿病伴肝损伤症状。

2.2 肝功能指标比较

通过检测ALT、AST、TBiL及Alb的血清含量，可作为评价肝功能损伤情况的指标，同时检测HA和LN，可作为评价肝硬化情况的指标。具体检测对比结果从表2中可见，模型组各项评价指标均差于对照组，两组间差异有统计学意义（P < 0.05）。

2.3 SREBP-1c与JNK表达水平对比

两组SREBP-1c与JNK蛋白表达水平从表3中可见，模型组两种因子表达水平均高于对照组，两组差异有统计学意义（P < 0.05），由此可见，2型糖尿病伴肝损伤大鼠的肝组织SREBP-1c与JNK蛋白表达增强与肝损伤相关。

表3 SREBP-1c与JNK表达水平对比

3 讨论

2型糖尿病患者分泌胰岛素的能力并非完全丧失，有的甚至会分泌过多的胰岛素，但胰岛素敏感度却明显降低，患者体内胰岛素处于相对缺乏状态，胰岛素分泌不足或作用缺陷导致糖、脂肪和蛋白质代谢异常。糖代谢紊乱引起的高血糖症会使糖原在肝组织堆积，导致肝微血管病理性损伤，脂肪代谢紊乱使游离脂肪酸过多进入肝组织，当超出肝脏清除能力时，形成脂肪肝或肝硬化等症状，因此临床上常见由糖尿病引起的肝损伤，这也成为我国危害人体健康的主要肝病之一[7-9]。本文为探寻2型糖尿病伴肝损伤的临床诊断指标，建立了2型糖尿病伴肝损伤大鼠模型，参考国内外文献和研究，通过观察大鼠肝损害情况和SREBP-1c及JNK蛋白表达水平，分析二者之间的关系。

1993年人们首次从细胞核中抽取纯化出固醇调节元件结合蛋白（SREBP），该蛋白属于碱性螺旋-环-螺旋-亮氨酸链转录因子，参与脂质和糖类的代谢，进一步研究发现其有3类异构体，分别为SREBP-1a、SREBP-1c及SREBP-2，每类异构体在体内分布不同且由不同启动子转录产生，故而在体内的蛋白表达部位有较大差异，其中SREBP-1c在人和鼠组织表达部位相近，尤其在肝脏中有高水平表达。SREBP-1c通过HMG-CoA合成酶、HMG-CoA还原酶及脂肪酸合酶等表达基因，调控胆固醇、三酰甘油等脂质的合成与吸收，在脂肪肝的形成中起到至关重要的作用[10]，但SREBP-1c属于无活性前途蛋白，在肝组织内调控脂质需要进一步转录活化，目前能确定多个因子参与其活化过程，其中胰岛素和胰高血糖素是较强的活化因子，其能促进SREBP-1c在肝组织中表达增加，导致肝组织脂质堆积造成肝损伤。因此检测SREBP-1c在肝组织中的蛋白表达水平能评价肝损伤情况。

JNK是丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）中的重要成员之一，JNK蛋白激酶有JNK1、JNK2 和 JNK3三种基因编码，在人体各种组织器官中普遍存在，如果JNK长期处于活化状态会使细胞凋亡，当肝组织中JNK长期处于活化状态，必定会使肝细胞凋亡而造成肝损伤[11]。另外，健康人体的胰岛素结合胰岛素受体，受体底物又酪氨酸磷酸化发挥作用，JNK高表达会提高胰岛素受体底物的丝氨酸磷酸化比例，酪氨酸磷酸化比例相应的降低，细胞内胰岛素信号传导受阻，肝脏胰岛素抵抗从而形成。因此检测肝组织JNK蛋白表达水平能评价肝损害情况，本文通过检测SREBP-1c和JNK蛋白表达水平，发现其表达水平与肝损伤有较大的相关性。

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篇12

[中图分类号] R772.21 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）12（c）-0095-04

The curative effect of Qingjiefang combination with large dose of Houstonian Cordata on Herpes Sim plexeratitis and impact on patient′s serum and tear index of oxidative stress

SHI Yu-jin

Department of Ophthalmology，Maternity and Child Health Hospital of Quanzhou City in Fujian Province，Child′s Hostipal， Quanzhou 362000，China

[Abstract]Objective To explore the effect of Qingjiefang combination with large dose of Houstonian Cordata on Herpes Sim plexeratitis and impact on serum and tear index of oxidative stress.Methods 81 Patients with Houstonian Cordata on Herpes Sim plexeratitis and TCM syndrome type belonging to KangCheng from August 2012 to May 2016 had been randomly into control group（n=40） and observation group（n=41）.The control group was treated with Ganciclovir eye drops during the day，with Gel Ganciclovir during the night while the observation group was given Qingjiefang with large dose of herba houttuyniae in addtion，a course of treatment is 30 days，the clinical curative effect was compared.Results The serum，TAC and GSH-PX levels of two groups were higher than those of control group of treatment， MDA was lower than that of control group（P

[Key words]Qingjiefang；Large dose of herba houttuyniae；Herpes simplex viral keratitis；Serum and tears；Oxidative stress indicators

单纯疱疹病毒性角膜炎是临床常见的角膜病变，单纯疱疹病毒型是本病的病原体，该病具有类型多、易复发、迁延不愈的特点，而随着病情反复发作可引起角膜混浊日渐严重，是角膜疾病中致盲率较高的炎症性疾病[1]。近年来本病的诊疗水平有极大进步，以更昔洛韦为代表的广谱抗疱疹病毒药物的应用显著改善预后，但存在复发率高的弊端[2]。本病容易复发及病程迁延，研究显示，此类患者泪液及血液中氧化应激表现异常，采用清解方联合大剂量鱼腥草效果显著，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选取2012年8月～2016年5月于我院眼科确诊单纯疱疹病毒性角膜炎的患者81例纳入研究，依据随机数字表法分为对照组（n=40）和观察组（n=41）。对照组中男22例，女18例；年龄16～68岁，平均（34.70±9.67）岁；病程1～6个月，平均（3.72±0.95）个月；初次治疗29例，复发11例；病情分级：轻度15例，中度21例，重度4例；角膜炎类型：地图状角膜溃疡24例，树枝状角膜溃疡16例。观察组中男21例，女20例；年龄17～69岁，平均（33.86±9.37）岁；病程1～8个月，平均（3.68±0.92）个月；初次治疗30例，复发11例；病情分级：轻度16例，中度20例，重度5例；角膜炎类型：地图状角膜溃疡26例，树枝状角膜溃疡15例。诊断标准参照《眼科学》[3]：①存在反复发作病史或发热、感冒、外伤等诱因；②患眼异物感、刺痛、畏光、流泪、视物模糊、眼红，可见角膜水肿；③进行角膜知觉定性试验，发现消失或迟钝，操作时用无菌棉丝尖端轻触角膜，瞬目缓慢为知觉减退，无感知或瞬目运动为角膜知觉消失；④角膜炎症浅层型，表现为树枝状、星状病损，荧光素钠染色结果显示阳性。中医证型参照《中医病证诊断疗效标准》：眼痛明显，抱轮红赤，畏光流泪，视物不清，黑睛浅层如地图状、树枝状或如星点翳障，口苦口干，烦躁不安，舌红苔黄厚，脉弦数。纳入标准：①符合诊断标准，单眼发病并知情同意者；②经医学伦理会审核通过；③停止抗病毒药物使用>3 d；④中医证型属肝火亢盛者；⑤近期未用糖皮质激素治疗。排除标准：①妊娠期不便纳入者；②受试药物过敏者；③精神病不配合者；④肝肾功能障碍者。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2治疗方法

对照组白天用更昔洛韦滴眼液（湖北远大天天明制药，国药准字H20041429），1滴1次，2 h 1次。睡前眼下睑穹隆部用更昔洛韦眼用凝胶（湖北科益制药，国药准字H20050406）涂抹，30 d为1个疗程。

观察组采用中药自拟清解方，方由生石膏30 g，龙胆草、玄参、丹皮、生地黄、知母、蒲公英、金银花、黄芩、白术、木贼、黄芪、夏枯草、防风各15 g，蝉蜕10 g。由中药房统一提供并代煎，煎煮成300 ml，每日1剂，150 ml/次，2次/d。用无菌注射器吸取鱼腥草注射液（河北神威制药，国药准字Z13020885）3 ml，注入无菌眼药水瓶，1滴/次，2 h 1次。取5 ml注射器抽取3 ml鱼腥草注射液行结膜下加球旁注射，1次/d，30 d为1个疗程。

1.3观察指标

①观察抗氧化活力（TAC）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、丙二醛（MDA）等氧化应激指标改善情况，MDA以硫代巴比妥酸方法检测，GSH-PX、TAC用ELISA法检测，试剂盒为同一批次，由南京建成研究所提供。检测由同一位经验丰富的研究人员完成。②比较临床疗效差异。③对患者随访，比较治疗后6个月内复况。

1.4临床疗效

疗效参照《中医病证诊断疗效标准》[4]。治愈：刺痛、畏光等角膜刺激Y状消失，角膜溃疡已完全修复，角膜厚度正常，后弹力层皱褶及角膜部位水肿消退，实质浸润已吸收，荧光染色（-）。有效：症状改善，角膜溃疡及浸润愈合，上皮可见点状染色。无效：症状未改善，角膜溃疡及浸润未见愈合。

1.5统计学方法

采用SPSS 19.0统计学软件对数据进行分析，计量资料以x±s表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，以P

2结果

2.1两组患者治疗前后血清氧化应激指标的比较

两组治疗前各指标比较，差异无统计学意义（P>0.05）；治疗后2个月对照组血清TAC、GSH-PX水平升高，MDA降低，差异有统计学意义（P

2.2两组患者治疗前后泪液氧化应激指标的比较

治疗前指标比较，差异无统计学意义（P>0.05）；治疗后，对照组泪液中TAC、GSH-PX升高，MDA降低，差异有统计学意义（P

2.3两组患者临床疗效的比较

对照组总有效率为77.50%，观察组总有效率为95.12%，差异有统计学意义（χ2=5.357，P

2.4两组患者复发率的比较

对照组复发率为37.50%，观察组复发率为12.20%，差异有统计学意义（χ2=6.972，P

3讨论

单纯疱疹病毒性角膜炎是临床常见的感染性眼部疾病，好发于急性扁桃体炎等热病后，外伤、日晒、疲劳及激素应用也是常见诱因[5]。单纯疱疹病毒性角膜炎多沿三叉神经分布，当免疫力降低时，潜伏状态的病毒可因此活化而使感染复发[6]。病毒在上皮细胞内活化复制是其重要发病机理，因此治疗上以抑制角膜内病毒，减轻炎症为治疗思路。更昔洛韦是常用抗病毒药物，可选择性抑制病毒DNA合成，效果显著[7]。但研究表明其抗复发作用较差，且易产生耐药性。

单纯疱疹病毒性角膜炎隶属于中医“聚星障”范畴，中医认为其发病部位在眼，与肝脏关系密切。风热病邪是本病的主要病因[8]，脾胃湿热或外感湿邪，在内不得通泄，在外不得及时疏解时导致湿热熏蒸肝胆也可发病，但肝火亢盛是常见的证型，火邪循肝经犯目而发病。火为热之渐，火热邪气往往同时并存，但临床多以肝火亢盛证型为主。疾病初期病性以实为主，火热邪气易耗伤津液，导致气阴两虚，表现为虚实夹杂的局面。若失于治疗，又可因虚致实，导致瘀血、痰浊等病邪的产生，形成恶性循环。清解方以龙胆泻肝汤加减，其中龙胆草清泻肝火；黄芩、夏枯草入肝经，与龙胆草合用共奏清泻肝火功效；生石膏入脾胃、肺经，可清解气分实热，避免邪气入血分而加重病情；防风祛风止痛，有助于肝火疏散；金银花、蒲公英、蝉蜕、木贼共奏疏散风热，解毒功效，且能明目；丹皮、生地黄、玄参清热养阴生津；知母滋阴润燥；白术、黄芪补益肺脾，全方共奏清肝泻火、疏风滋阴功效。鱼腥草是治疗肺痈的要药，具有解热镇痛、抗菌、抗病毒、抗炎、调节免疫力作用。鱼腥草注射液是从鱼腥草中提取而来，富含鱼腥草素，对于单纯疱疹病毒性角膜炎具有显著疗效，其作用机制与免疫调节及炎症反应控制密切相关[9]。本研究在操作时采用大于常规剂量的3 ml鱼腥草注射液结膜下加球旁注射，使房水、角膜局部药物浓度保持在较高浓度，延长药物作用时间，使病程得到快速缩短。本研究观察组总有效率更高，证实该治疗方案的显著疗效。单纯疱疹病毒性角膜炎与氧化应激失衡的关系已得到证实，可表现TAC、GSH-PX水平降低，MDA则高于健康人群，导致机体抗氧化能力降低[10-11]。研究发现，氧化应激水平失衡也是机体炎症反应的重要病机，使TNF-α、IL-6等炎症因子水平升高，因此通过纠正氧化应激失衡已成为研究的热点[12]。本研究结果显示，观察组TAC、GSH-PX、MDA均改善更显著。现代药理研究发现，龙胆草、金银花、黄芩均有显著抗菌、抗病毒作用[13]；白术、黄芪可提高免疫力，调节T淋巴亚群，从而预防疾病反复发作[14]；丹皮、生地黄可改善微循环，促进炎症吸收；防风、蝉蜕可抑制组胺分泌，达到抗过敏作用。

综上所述，观察组治疗方案效果显著，可作为此类患者的常规治疗方案。研究表明，T淋巴亚群水平失调及炎症因子水平提高与本病关系密切，也是引起氧化应激失衡的重要因素，日后可增设指标以更好地评价疗效[15]。

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