时间:2022-04-10 23:52:01
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意识形态工作是党的一项极端重要的工作,关乎旗帜、关乎道路、关乎国家政治安全。按照属地管理、分级负责和谁主管谁负责的原则,党委(党组)领导班子对本单位意识形态工作负主体责任。党委(党组)书记是第一责任人,应当旗帜鲜明地站在意识形态工作第一线,带头抓意识形态工作,带头管阵地把导向强队伍,带头批评错误观点和错误倾向,重要工作亲自部署、重要问题亲自过问、重大事件亲自处置。党委(党组)分管领导是直接责任人,协助党委(党组)书记抓好统筹协调指导工作。
二、学习时间及方式
每个月在10日、20日采取集中学习的方式进行学习。
三、学习教育对象
全局党员(干部)
四、学习教育内容
第一阶段:开好“两学一做”动员会,进行动员部署,搞好思想发动,迅速在全局掀起学习教育活动热潮;围绕“坚定理想信念、明确整治方向”,组织开展“弘扬精神、做理想信念坚定者”学习讨论;开展主题党日活动,组织党员重温入党誓词。
第二阶段:学习《关于实现中华民族伟大复兴的中国梦论述摘编》、《关于全面深化改革论述摘编》、《谈治国理政》、《关于全面依法治国论述摘编》、《学习同志机关党建中央论述》、《关于严明党的纪律和规矩论述摘编》、《摆脱困难》、《之江新语》、《系列重要讲话读本》、《用典》。
第三阶段:围绕“坚守纪律底线、树立清风正气”,扎实开展“学党规党纪•知责明界”学习讨论。12月底前,我院要召开“两学一做”专题组织生活会和民主评议党员工作,
【关键词】 当归补血汤/药理学;动脉粥样硬化/中药疗法;信号转导;基因表达调控;细胞培养
动脉粥样硬化(atherosclerosis, as)是导致心脑血管疾病发生的重要病理改变,而氧化低密度脂蛋白(oxidized lowdensity lipoprotein, oxldl)对as的发生发展起着非常重要的作用。wwW.133229.CoM在动脉内膜下,低密度脂蛋白经氧化修饰成oxldl,后者可以抑制低密度脂蛋白与其受体结合,抑制巨噬细胞的移动,致使局部oxldl大量堆积,形成泡沫细胞,从而加速as的形成[1]。brand等[2]发现as病灶粥样硬化斑块内膜和中膜的平滑肌细胞及巨噬细胞、内皮细胞里均有活化的核转录因子κb(nuclear factorkappa b,nfκb)。nfκb可能是启动as的关键因子[3],由血管壁ldl的修饰到引发炎症和趋化因子的释放、内皮细胞黏附分子的表达等程序导致单核细胞向待损害部位聚集,nfκb都参与了其中[4-6]。当归补血汤目前已被广泛应用于as及其相关疾病的治疗,疗效确切,具有降低血脂和抗氧化损伤的效应,能够明显减轻由oxldl引起的单核细胞的趋化作用[7-9]。为探讨该方抗as的作用机理,本研究观察了其含药血清对oxldl激活小鼠单核细胞系raw2647细胞中nfκbp65 mrna表达的影响。现报道如下。
1材料与方法
11主要仪器及试剂bna3210型co2培养箱(日本espec公司),swcj1fd型超净工作台(中国苏州净化设备公司),axiovert 200倒置显微镜(日本zeiss公司),abi3900台式高通量dna合成仪(美国abi公司),abi7300荧光定量pcr仪(美国abi公司),sigma3k18型高速低温离心机(美国sigma公司),小菊白内酯(parthenolide,par;美国santa cruz 公司,批号:sc3523),rpmi1640培养基(美国invitrogen公司,批号:12491015),胎牛血清(美国invitrogen公司,批号:10099158),逆转录试剂盒(中晶公司,批号:k1621),总rna提取试剂(trizol reagent,美国invitrogen公司,批号:15596026)。
12实验动物健康新西兰大耳白兔共8只,由广州中医药大学实验动物中心提供,许可证号:scxk(粤)20030001,雌雄各半,3~4月龄,体质量15~20 kg。
13当归补血汤水煎液的制备黄芪、当归均使用道地药材,为甘肃产品,购自广东省药材公司并加以鉴定。按照《内外伤辨惑论》原方中黄芪和当归以质量比5∶1的配伍比例称取生药,以每g生药加水6 ml,冷水浸泡30 min,煮沸后再文火慢煎40 min,趁热过滤,滤液自然滴尽,第2煎按每g生药加水4 ml,煎法同前,合并滤液,95 ℃水浴浓缩成含生药084 g/ml的水煎液,4℃保存。
14血清制备8只兔随机分为空白血清组和含药血清组,每组4只,分别灌胃生理盐水和当归补血汤水煎液,实际灌胃剂量按动物体表面积换算得出,临床等效剂量为168 g/kg,按每kg体质量每天灌胃量为5倍临床等效剂量即84 g·kg1·d1,连续灌胃3 d,第4天上午于禁食12 h后灌胃1次,1 h后乙醚麻醉动物,无菌条件下心脏采血,将抽取的血液室温下静置3 h,离心,取上清,56 ℃水浴中灭活,022 μm微孔滤器过滤除菌,-70 ℃保存备用。
15细胞培养将raw2647细胞培养于含体积分数10%胎牛血清的rpmi1640培养液中,置于37 ℃ 、体积分数5% 的co2培养箱中培养,2 d换液1次。细胞长满单层后可传代,用25 g/l的胰酶乙二胺四乙酸消化处于生长旺盛期的单层培养细胞,再用含体积分数10%胎牛血清的rpmi1640培养基终止消化,1 000 r/min离心5 min,收集细胞,制成细胞悬液,细胞计数,调整细胞密度为3×104 /cm2,再培养。
16实时荧光定量pcr法检测raw2647细胞中nfκbp65 mrna的表达量从gen bank上查找和对比目的基因,设计引物:mouse gapdh:上游引物5aacagggtggtggacctcat3;下游引物5gggatagggcctctcttgct3。mouse nfκbp65:上游引物5acgcggattcctgtacacct3;下游引物5caggagctccacaggacaga3。合成引物。
17实验分组及处理实验分为空白对照组、oxldl组、par组、含药血清组。调整细胞悬液密度5×104/cm2,按分组接种于24孔板中,每组4个复孔。在37℃ 、体积分数5% co2饱和湿度下培养24 h。弃去原培养液,以磷酸盐缓冲液(pbs)洗涤细胞2~3次。空白对照组、oxldl组加含体积分数10%空白血清的rpmi1640培养液孵育24 h;par组加含体积分数10%空白血清的rpmi1640培养液孵育24 h,再加入终浓度为10 μmol/l par预处理2 h;含药血清组加含体积分数10%含药血清的rpmi1640培养液孵育24 h。除空白对照组外,其他各组分别加入100 μg/ml oxldl刺激4 h。抽提rna:弃原培养液,不洗,每孔各加500 μl 总rna提取试剂,吸打混匀。室温静置5 min。加100 μl氯仿,剧烈震荡15 s。室温静置5 min。4℃、12 000 r/min离心15 min,此时溶液分为3层,取上清液,移至新离心管中,加250 μl异丙醇,混匀,室温静置10 min。4℃、12 000 r/min离心8 min。弃上清,加入500 μl 体积分数75%乙醇洗沉淀,4℃、12 000 r/min离心5 min,风干5 min。焦碳酸二乙酯(depc)溶解沉淀,-70℃保存。逆转录反应:加rna样品11 μl,六聚物引物1 μl入pcr小管,吸打混匀。放入pcr仪中,70℃、5 min。取出加入5倍反应缓冲液4 μl、rna酶抑制剂1 μl、三磷酸脱氧核糖核苷(dntp) 混合液 2 μl,吸打混匀。放入pcr仪中,25℃、5 min。取出加入逆转录酶1 μl,吸打混匀。放入pcr仪中,25℃、10 min,42℃、60 min,70℃、10 min。荧光定量pcr反应:准备96孔板,按上述分组,每组各4个复孔,25 μl反应体系,依次加入蒸馏水101 μl、荧光染料混合液125 μl、上游引物02 μl、下游引物02 μl、样品溶液2 μl。吸打数次混匀,稍离心。放入pcr仪,95℃、15 s,60℃、60 s,进行40个循环。反应结束后,由电脑自动分析并根据标准曲线计算样品及内参的基因拷贝数。
18统计学方法结果以鸭乙肝病毒为标准品,计算样品目的 mrna拷贝数与内参照三磷酸甘油醛脱氢酶(gapdh) mrna拷贝数的比值进行统计分析。数据采用spss 130 软件包进行统计分析。
2结果
raw2647细胞nfκbp65 mrna表达的变化:各组溶解曲线峰值较集中,未出现非特异性扩增(图1-c、图2-c,彩图见第556页)。各组内参照gapdh cdna扩增循环数较集中,提示各组样品浓度较接近(图2-b,彩图见第556页);各组nfκbp65 cdna扩增循环数差距明显(图1-b,彩图见第556页),提示各组nfκbp65 mrna表达量有明显差异。表1结果显示:oxldl组与空白对照组比较差异有显著性意义(p<005),提示以oxldl刺激raw2647细胞后nfκbp65 mrna表达增强。含药血清组、par组分别与oxldl组比较差异均有显著性意义(p<005),说明当归补血汤含药血清能下调nfκbp65 mrna的表达,par可明显抑制nfκbp65的表达。表1各组raw2647细胞nfκbp65 mrna表达量比较
3讨论
nfκb通路是一条重要的细胞内信号转导通路,参与了多种生理病理过程的调节。其与as的发生发展关系密切,已成为国内外学者进行抗as研究所高度重视的一个药理学作用靶点。oxldl首先激活nfκb上游激酶,引起级联反应,最终活化nfκb,使其转入核内,引起相关基因的表达,启动一系列炎症因子的基因转录,而炎症因子的过度表达又会加重nfκb的活化[10]。nfκb家族成员以不同组合形成异源二聚体,每一个nfκb蛋白均有特殊的作用,其中p65/p50异聚体在大多数哺乳动物细胞中大量存在,p65含有强转录激活结构域,与as的发生发展关系密切[11]。因此,本实验观察了当归补血汤含药血清对oxldl诱导的raw2647细胞中p65 mrna表达的影响,探讨当归补血汤是否通过nfκbp65起到抗as作用。本实验结果表明:oxldl可明显激活raw2647细胞中的nfκb通路,当归补血汤含药血清能下调nfκbp65 mrna表达。
综上所述,在as发生的早期脂质浸润、泡沫细胞形成过程中,nfκb通路发挥着重要作用,当归补血汤可能通过调节该通路以调控相关致炎因子的表达进而影响as的发生发展,抑制、阻断nfκb信号转导通路可能是当归补血汤抗as损伤作用的机制之一。
【参考文献】
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[2]brand k, page s, rogler g, et al. activated transcription factor nuclear factorkappa b is present in the atherosclerotic lesion [j]. j clin invest, 1996,97: 1715.
[3]libby p. inflammation in atherosclerosis [j].nature,2002,420:868.
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[7]陈淑冰,孟华民,胡文尧.当归补血汤抗自由基作用的研究[j].中药药理与临床,1995,1(1):68.
[8]陈淑冰,孟华民.当归补血汤抗氧化作用的研究[j].四川省卫生管理干部学院学报,1995,14(2):3.
XXX分公司党委根据自身实际情况,对照文件要求逐项进行自查,发现存在以下问题:
1.党委中心组理论学习不够深入,学习原著、原文较少,学习研讨内容流于形式。
2.党委会记录不够规范,未对每个议题做到痕迹化管理。
3.基层党支部“主题党日+”制定了年度、季度计划,但活动落实不够,大部分仅限于学习资料、观看视频。
4.在党支部建设方面存在有“重表象、轻质量”倾向,开展党员教育活动时,有仅学习文章、资料,没有深度学习原文、原著等情况。并且在执行4+X学习时,未能全部到位。
二、工作亮点
一是厘定责任清单。坚持党员领导干部“五带头”推进“两学一做”学习教育常态化制度化任务清单,从带头开展学习教育、带头做合格党员合格领导干部、带头严肃党内政治生活、带头做好问题整改、带头推进工作任务落实方面量化细化为5项具体任务,同时履行指导职责,抓好分管领域的学习教育,并结合《将改革进行到底》、“省第十一次党代会”精神学习贯彻,在分管部门和班组进行1次党课辅导。强化支部书记主体责任和组织推动作用,组织落实“”、召开组织生活会、民主评议党员、加强问题整改逐项列出支部书记承担的责任和应当做好的工作,明确抓学习教育责任。
二是加强督导考核。通过采取党支部交叉检查、党群部门随机抽查等方式,对各党支部开展学习教育情况进行督促指导,及时发现存在问题,有针对地提出指导意见。同时把组织开展“两学一做”学习教育情况纳入各党支部党建工作考核的重要内容,把考核结果作为评价各级党支部书记履行管党治党责任情况的重要依据,对工作不到位的及时进行约谈提醒,对工作落实不力、搞形式走过场的严肃批评、及时纠正。
三是注重分类指导。注重层次性,区分普通党员和党员领导干部,在“学”“做”“改”的目标、内容、方式和载体等方面要有区别,对党员领导干部要坚持更高标准、体现更严要求。注重针对性,根据普通党员、党员干部等不同群体,采取不同措施办法,确保每个党员都能受教育、有提高。注重灵活性,鼓励基层党支部创造性开展工作留出余地和空间,有的放矢、因地制宜地开展学习教育。凡是有利于调动党员参与学习教育积极性的做法都要予以鼓励,凡是有利于提升学习教育效果的措施都要予以倡导。
三、下步整改措施
(一)强化落实中心组学习计划。严格执行年初制定的《分公司党委中心组理论学习计划》开展党委中心组学习,创新学习方式、增强上下联动、和互动,进一步加强对原著原文学习研讨,通过开展中心组成员主题发言、相互交流研讨等方式,全面提升政治理论知识水平。
一、理论学习
1、4月2日下午,第二支部召开支委会,制定学习计划,结合我支部实际情况,分为病房、行政两个党小组学习,分别由支部委员xx、xx于每周五集中组织学习;全体党员进行一次自学。
2、4月2日上午,第二支部行政、病房党小组分别进行了第一次集中学习,学习由支部组织委员xx、宣传委员xx各自主持领学,25名党员参加了学习,2名党员因工作原因请假。
3、4月6日下午,第二党支部病房小组组织党史学习教育第二次集中学习,学习由支部宣传委员xx主持,医院纪委委员xx同志领学,第二党支部第一党小组9名党员参加了学习,1名党员请假。