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项目类别 项目名称 负责人 职 称 研究期限 计划完成年月 实际完成年月 实际参加人数 高级 中级 初级 博士生 硕士生 其它 完成论著 (篇册) 学术会议交流 期刊发表 专著出版 大会特邀报告 分组报告、展示 已发表 待发表 已出版 拟出版 全国性科技期刊 国外学术刊物 国际 国内 研究成果(项) 评议鉴定 咨询调研报告 发明专利 已推广 人才培养 人 硕士(已获学位) 硕士(在校) 进修教师 结题种类 正常( )、中止( )、撤消( )、提前结题( ) 成果获奖情况
研究经费(元):
批准资助金额 拨入金额 经 费 支 出 经费 结余
合计 科研业务费 实验材料费 仪器设备费 实验室改装费 协作费 项目组织实施费
二、研究工作总结
研究工作总结是全面反映本项目研究工作的学术性总结报告。请按照下列提纲编写,要求简明扼要,实事求是,以学术内容为主,一般字数控制在2000字左右。如需要,可另加页。 1. 研究内容及研究方法。
2. 要说明主要的科学发现和创新之处,并列出具体的内容和必要的数据。
3. 成果的科学意义和应用前景(对基础研究,着重阐明其科学意义;对应用基础研究和应用研究,着重阐明其应用前景);学术界的反映和引用;国际合作与交流的情况;转入国家和自治区其它重大科研计划的情况。
4. 计划(如有变动,须说明)的完成情况与存在的问题。
项目负责人(签章):
年 月 日
三、完成论著目录
序号 主要作者 论著名称 备 注 (请注明:的刊物名称,日期,卷(期),起止页码;或著作的出版日期,出版社名称,出版社地址)
此页不够可另加页。
四、研究成果目录
成 果 名 称 主要完成者 组织鉴定单位 及日期
获准专利国别、 类别及专利号
五、所在单位意见
单位盖章 年 月 日
中图分类号: P49 文献标识码: A DOI编号: 10.14025/ki.jlny.2016.01.059
吉林省是农业大省,长期以来由于基础设施建设不够,距离现代化农业发展的要求还存在一定的差距,一定程度上还是靠天吃饭,对气象的依赖程度还是相当大的。农业的防灾、减灾目前仍是薄弱环节,因此,我省气象部门的为农服务显得非常重要,而作为气象影视则是气象部门为农服务的重要窗口。因此,怎样利用气象影视节目把气象信息及时快捷的传达给农民朋友,并且有效的指导他们预防灾害性天气、气候带来的影响,使农民朋友的生产生活更加顺利,真正达到让气象服务走进农民的心里,提高他们的经济效益,同时也对气象影视节目提出了更高的要求。
1为农服务气象影视节目的现状和不足
我省吉视乡村频道自2001年7月开播以来,先后有许多档非常丰富的、深受广大观众认可喜爱的农业类节目,如《乡村导视》、《乡村大戏台》、《乡村聚焦》、《乡村四季》等。《乡村气象站》则是该频道一档气象影视服务节目。对于我省唯一的一档为农服务的气象影视节目,得到了广大观众和电视媒体的充分肯定和重视。但对于气象为农服务节目来说,还存在着一些不足。
1.1农事播报不够专业
目前吉视乡村频道《乡村气象站》是我省唯一一档农业气象服务类节目,制作这档节目的工作人员少,且其他农业、气象专业人员更少,不能深入了解我省各个地区农牧业的实际情况。所以造成了农业气象节目的农时农事提醒的专业性不够。
1.2表现形式单一
目前《乡村气象站》天气预报节目,由于栏目组人员不足,只能是单纯依靠主持人播报表现形式完成每天的节目,缺少与其相配合农事活动视频画面、图表、动画等,只有在互联网下载的图片及滚屏提示语和后面每个广告版面的10个地级市的72小时天气预报。缺少季节性、地域性及有针对性的农牧业专业为农气象服务,如灾害预警、土壤干湿度监测、春播秋收气象服务、病虫害防治等气象服务。这样造成农业气象节目表现形式单一,预报及主持人播报内容不够精细,不能提高收视率,降低经济效益的后果。
2提高为农服务节目质量,更好服务“三农”
2.1加强对农时农事的气象服务
节目编导针对我省气象服务中心提供不同地域气象数据的应用分析,对每天的天气变化对农事活动的影响进行分析,让主持人有针对性进行播报,如有突发灾害性天气发生时,提前做好防范措施,避免给广大农民的生产生活造成重大损失。例如在春播时期,对于吉林省各地区的农作物来说,无论是温度、湿度、土壤解冻、土壤墒情等条件下,主持人与气象农业专家进行分析沟通后,给广大的农民朋友提出指导建议,使农业生产能够顺利进行。
2.2加强对农作物生长周期的气象服务
在一年四季里,随着季节的变化,农作物生长的气象条件也有不同的变化。《乡村气象站》节目可以根据农作物的不同时期的变化,专门制作有关农作物在不同时期可能遇到的灾害及预防,如灾害性天气、病虫害等。
2.3加强对农业气象科普知识的宣传
随着我国经济的发展,农民的自身素质及修养也不断提高,在当今的互联网时代,许多农民已经从重体力的农活解放出来,用上了电脑,手机客户端,开网店卖自家生产的农产品,而《乡村气象站》节目也应与时俱进,让农民朋友了解天气现象形成的原因及造成的影响,主持人对电视观众讲述农业气象科普知识,提高群众的防灾减灾意识,从而达到增强农民对灾害性天气、气候及病虫害等的应急处理能力。
2.4创新气象为农服务节目的表现形式
目前我国农业类气象节目分三种:一是每天播天气预报节目;二是农业气象专题节目;三是气象频道农业气象服务节目。我们要拓宽视野创新为农节目的表现形式,可取其所长,避己所短,把其它节目的优点借鉴过来,丰富我省的农业气象节目。如四川省的《气象乐活帮》节目中将气象专家卡通形象借鉴过来,进行专家与主持人的互动;黑龙江的《农气帮女郎》节目中用了快板书的形式解说病虫害的口诀等。
2.5加强对气象为农节目人员的培养
打造一档优秀的为农服务气象节目需要有一个优秀的节目创作团队,人才培养是必不可少的。一是有打造王牌主持人的意识,主持人不仅具有主持的专业知识,而且还要有农业、气象专业知识;二是节目的编导必须有编导专业技能,而且加强对气象知识、农业知识学习,努力做一个综合性复合人才;三是要有制作技术水平高的制作人才,编导要求制作什么动画,就能按照其意图完成。
DOI:10.3969/j.issn.1005-5304.2016.01.013
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1005-5304(2016)01-0056-04
Effects of Different Extracts of Tangwang Mingmu Granules on High Glucose Induced VEGF and IL-1α Expressions in Vascular Endothelial Cells HAO Chang-ying1, CHEN Ming-xia2, MA Wen-bin1, GUO Ping3, LV Hai-bo3, LIU Ye4, LIAN Zeng-lin4 (1. Beijing Red Sun Pharmaceutical Co., Ltd., Handian Group, Beijing 100103, China; 2. Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100102, China; 3. Beijing Handian Pharmaceutical Co., Ltd, Handian Group, Beijing 100103, China; 4. Beijing Handian Academy of Chinese Medicine, Handian Group, Beijing 100103, China)
Abstract: Objective To observe the mechanism of action of different extracts of Tangwang Mingmu Granules on high glucose induced VEGF and IL-1α gene and protein expressions in vascular endothelial cells. Methods Human umbilical vein endothelial cells EA.hy926 were divided into six groups: blank, high glucose, Tangwang Mingmu Granules, extract 1 (glycoside and flavonoid), extract 2 (organic acid and polysaccharides) and extract 3 (alkaloids) groups. High concentration glucose was used to establish the high glucose model in EA.hy926 cells. The expressions of VEGF and IL-1α mRNA were detected by semi-quantitative RT-PCR. The contents of VEGF and IL-1α protein were tested by ELISA. Results The gene expression and protein levels of VEGF and IL-1α were significantly up-regulated under the high glucose condition (P extract 3> extract 2. Conclusion The action intensity of glycosides and flavonoids, alkaloids, organic acids and polysaccharides on VEGF and IL-1α expression in Tangwang Mingmu Granules weakens in sequence.
Key words: Tangwang Mingmu Granules; diabetic retinopathy; human umbilical vein endothelial cells EA.hy926; VEGF; IL-1α
糖网明目颗粒用于治疗糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)。本课题前期研究结果表明,糖网明目颗粒能明显改善糖尿病大鼠视网膜微血管病理学状态,降低血管生成相关因子的蛋白和基因水平[1-2]。本实验采用血管内皮细胞高糖模型,进一步探讨糖网明目颗粒不同提取部位对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞EA.hy926中血管内皮细胞生长因子(VEGF)和白细胞介素-1α(IL-1α)基因和蛋白表达的作用机制。
1 实验材料
1.1 细胞
人脐静脉内皮细胞EA.hy 926购于中国科学院上海细胞库。
1.2 药物及提取部位
糖网明目颗粒处方由女贞子、乌梅、黄连、密蒙花、肉桂、黄芪、益母草组成,所用饮片购于安国市萌露中药饮片有限公司,经北京汉典中医研究院刘晔老师鉴定,均符合2010年版《中华人民共和国药典》标准。糖网明目颗粒提取物和不同提取部位由北京汉典中医研究院有限公司提供,采取醇提、水提相结合方法,将各饮片中的主要药效物质充分提取,最后经喷雾干燥制成提取物。其中,部位1为黄芪、女贞子、密蒙花提取物,主要含苷类和黄酮类物质;部位2为乌梅、肉桂提取物,主要含有机酸和多糖类物质;部位3为益母草、黄连提取物,主要含生物碱类物质。
1.3 主要试剂与仪器
胎牛血清(FBS),Hyclone,SH30070.03;高糖DMEM培养液,Hyclone,SH30022.01B;0.25%胰蛋白酶,Hyclone,SH30042.01B;DMSO,Amresco,0231);青链霉素混合液,Solarbio,P1400-100;C8661-25G;RT-PCR试剂盒(TaKaRa,RR019A),ELISA试剂盒(北京鑫方程生物技术有限公司)。MCO-175二氧化碳培养箱(SANYO),BDS200倒置相差显微镜(奥特光学),DPL-ⅡA型喷雾制粒仪(重庆精工制药机械有限责任公司),BIOMATE型紫外可见分光光度计(Thermo),GE4852型PCR仪(杭州柏恒科技有限公司),JY600电泳仪(北京君意东方电子设备有限公司),ChampGel 5000型全自动凝胶成像系统(北京赛智创业科技有限公司),MULTLSKAN MK3酶标仪(Thermo)。
2 实验方法
2.1 细胞培养及药物干预
EA.hy926细胞第3代经胰酶消化,用普通培养液(含10%FBS、1×105 U/L青霉素、100 mg/L硫酸链霉素的高糖DMEM培养液)稀释成2.5×104/mL的细胞悬液,将3×106个细胞接种于25 cm2培养瓶中,普通培养液培养24 h后空白组换用普通培养液、高糖组换用D-葡萄糖培养液体外模拟EA.hy926细胞高糖模型,全方组换用D-葡萄糖+糖网明目颗粒培养液,部位1组换用D-葡萄糖+部位1培养液,部位2组换用D-葡萄糖+部位2培养液,部位3组换用D-葡萄糖+部位3培养液,继续培养24 h后提取总RNA。
糖网明目颗粒培养液制备:精密称定糖网明目颗粒提取物0.444 4 g至50 mL离心管中,于超净台内加无血清高糖DMEM培养液至40 mL,涡旋震荡使药物溶解,静置30 min后混匀,5000 r/min离心20 min,吸取上清液,用0.45 μm滤器无菌条件下过滤,加入4.44 mL FBS,混匀制成贮存液,封口,于4 ℃冰箱内保存备用。此时,贮存液含糖网明目颗粒提取物浓度为10 mg/mL,含10%FBS。临用时将贮存液梯度稀释至所需浓度2.5 mg/mL。其中,各提取部位按照其所占处方比例、提取率折算,相当于全方剂量,工作液配制方法同糖网明目颗粒全方。
D-葡萄糖培养液的制备:精密称定D-葡萄糖0.459 0 g至36 mL高糖DMEM培养液中,混匀溶解,过滤,加4 mL FBS,混匀,4 ℃封口保存。此时含葡萄糖100 mmol/L,10%FBS。临用时用相应液体稀释至40 mmol/L,混匀,进行细胞干预。
2.2 高糖细胞相关基因表达检测
细胞分组及药物干预同“2.1”项。药物干预24 h后,按照试剂盒说明书提取总RNA,以紫外分光光度法测定其浓度,检测其质量。按照试剂盒说明书进行反转录PCR反应,条件为:94 ℃、2 min,94 ℃、30 s,58 ℃、30 s,72 ℃、1 min,72 ℃、5 min,35个循环后转为4 ℃保存。以1.5%琼脂糖凝胶电泳检测上述反应产物,用Lane ID凝胶图像分析软件对PCR产物进行半定量分析测定,基因表达水平以β-actin为参比。PCR引物由北京赛百盛公司合成,详见表1。
2.3 高糖细胞相关蛋白表达检测
细胞分组及药物干预同“2.1”项。药物干预24 h后,吸取细胞上清液至预冷的1.5 mL无菌EP管中,同组混匀,封口,-80 ℃保存备用。标准品按照说明书稀释好5个梯度,各梯度每孔加样量均为50 μL。分别设空白孔、待测样品孔,每组3个复孔。向待测样品孔中先加样品稀释液40 μL,再加待测样品10 μL,混匀。封板膜封板后于37 ℃温育30 min。小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液重复洗5次,拍干。每孔加入酶标试剂50 μL。封板膜封板后37 ℃温育30 min,如前法重复洗5次,拍干。每孔先加入50 μL显色剂A,再加入50 μL显色剂B,轻轻震荡混匀,37 ℃避光显色15 min。每孔加终止液50 μL,终止反应。于450 nm波长处依序测各孔吸光度值(OD值)。以标准物浓度为横坐标,OD值为纵坐标,绘制标准曲线,计算直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
3 统计学方法
采用SPSS16.0统计软件进行分析。实验数据以―x±s表示,多组间比较采用方差分析。P
4 结果
4.1 糖网明目颗粒不同提取部位对高糖诱导的血管内皮细胞中血管内皮细胞生长因子基因表达的影响
实验结果显示,血管内皮细胞高糖诱导24 h后,VEGF基因表达水平显著上调(P部位3组;而部位2组显著上调(P
4.2 糖网明目颗粒不同提取部位对高糖诱导的血管内皮细胞中血管内皮细胞生长因子蛋白表达的影响
实验结果显示,血管内皮细胞高糖诱导24 h后,VEGF蛋白表达水平显著增高(P部位3组;而部位2组显著上调(P
4.3 糖网明目颗粒不同提取部位对高糖诱导的血管内皮细胞中白细胞介素-1α基因表达的影响
实验结果显示,血管内皮细胞高糖诱导24 h后,IL-1α基因表达水平显著上调(P部位2组>全方组。提示在抑制由于高糖导致的血管内皮细胞IL-1α基因表达方面,糖网明目颗粒各部位作用强度为:部位1>部位3>部位2。结果见图3。
β-actin
图3 各组血管内皮细胞IL-1α基因表达(―x±s,n=3)
4.4 糖网明目颗粒不同提取部位对高糖诱导的血管内皮细胞中白细胞介素-1α蛋白表达的影响
实验结果显示,血管内皮细胞高糖诱导24 h后,IL-1α蛋白表达水平升高(P部位3组>部位2组。提示,在抑制由于高糖导致的血管内皮细胞IL-1α蛋白升高方面,糖网明目颗粒各部位的作用强度为:部位1>部位3>部位2。结果见图4。
5 讨论
DR是糖尿病微血管病变中主要的眼部并发症,其致盲的主要原因是由于新生血管引起反复的玻璃体出血和最终的牵引性视网膜脱离等一系列并发症[3]。高血糖是糖尿病最基本的病生理状态,亦是导致内皮功能紊乱的根本原因。糖尿病血管内皮细胞功能紊乱被认为是糖尿病血管并发症发生发展的起始步骤[4]。研究表明,高血糖通过氧化应激导致血管内皮细胞损伤和循环中内皮祖细胞数目下降且功能障碍,从而导致糖尿病伤口难以愈合、缺血心肌冠脉侧枝形成不良[5]。而VEGF是目前所知最强的内皮细胞选择性促有丝分裂肽和血管生成因子,与受体结合后,可刺激血管内皮细胞增殖及移行、细胞外基质变性,诱导新生血管的形成。其病理改变在本质上均是体内动态平衡的失调,血管刺激因素增强和/或抑制因素减少使两者平衡失调,最终引起新生血管生成。康氏等[6]临床观察显示,DR程度与血清VEGF含量直接正相关,提示血清VEGF含量测定可作为判定DR病变程度的参考指标。IL-1可能是视网膜炎症引起血视网膜屏障损害的重要因子,其可引起多核细胞和单核细胞向视网膜血管外迁移,血清蛋白向玻璃体内弥散及红细胞向玻璃体内渗漏等,造成视网膜血管内皮细胞间出现许多大裂隙,使血-视网膜屏障出现缺损,导致局部水肿、渗出、出血和细胞浸润,其对肿瘤坏死因子-α促进新生血管形成的效应也具有协同作用[7-8]。
本实验结果显示,糖网明目颗粒不同提取部位能不同程度地抑制高糖诱导的血管内皮细胞中VEGF和IL-1α基因和蛋白表达,其中以部位1作用最明显,部位3次之,部位2无此作用或作用不明显,这与DR发病机制和糖网明目颗粒组方规律一致。DR病机是气阴两虚,方中黄芪补气,女贞子补肝肾明目,密蒙花清热养肝、明目退翳,这3味药在方中比例较大,补气益肝肾,从根本上调理DR病程中之气阴两虚状态。另外,气虚致气血瘀滞;阴虚生热,煎熬津液,精亏液少,血黏不畅。方中益母草活血调经、利尿消肿,黄连清热燥湿、泻火解毒,而此2味药所含有的生物碱类物质如黄连素又有一定的抗炎作用,两者共用,能调理DR病程中阴虚夹热之瘀滞状态,改善DR病程中炎症反应。乌梅收敛生津止血,与黄芪配伍补气养血;肉桂补火助阳活血,与黄连配伍,水火既济,安神宁血,二者若单独使用,从本实验结果看药效不明显。
综上,在调控因高糖导致的血管内皮细胞VEGF和IL-1α基因和蛋白表达升高方面,糖网明目颗粒各部位作用强度为:部位1(苷类和黄酮类)>部位3(生物碱类)>部位2(有机酸和多糖类)。提示糖网明目颗粒及其不同提取物通过调控高糖状态下血管内皮细胞的VEGF和IL-1α基因和蛋白表达,从而抑制视网膜新生血管形成和改善视网膜局部水肿、渗出、出血和细胞浸润状态,进而达到防治DR的目的。
参考文献:
[1] 蒿长英,陈明霞,郭平,等.糖网明目颗粒对糖尿病大鼠视网膜病变的防治作用及机制研究[J].中国中医药信息杂志,2015,22(1):62-66.
[2] 蒿长英,陈明霞,郭平,等.糖网明目颗粒提取物对缺氧/高糖状态下血管内皮细胞肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1α表达的影响[J].中国中医药信息杂志,2015,22(8):58-62.
[3] 朱洪丽.血管内皮细胞生长因子(VEGF)与增殖型糖尿病视网膜病变相关性的研究[D].沈阳:中国医科大学,2008.
[4] 刘慧,王小军,胡荣,等.星形胶质细胞[J].生理科学进展,2004,35(1):86-91.
[5] PORTER J T, McCARTHY K D. Hippocampal astrocytes in situ respond to glutamate released from synaptic terminals[J]. J Neurosci, 1996,16(16):5073-5081.
[6] 康前雁,杨玉,王玉琴,等.糖尿病视网膜病变与血清VEGF含量的相关性[J].西安交通大学学报(医学版),2003,24(4):392-393,402.
[7] KON C H, OCCLESTON N L, ANYLWARD G W, et al. Expression of vitreous cytokines in proliferative vitreoretinopathy:a pospective study[J]. Invest Ophthalmol Vis Sci,1999,40:705-712.
1.生要取得今年思想政治理论课社会实践学分和成绩的,每人必须根据今年思想政治理论课社会实践的要求,提交以下材料:
(1)符合要求的思想政治理论课社会实践调查报告(论文)打印稿一份(个人社会实践报告文科学生3000字以上、理工科学生2000字以上;团队社会实践报告6000字以上);思想政治理论课社会实践调查报告(论文)格式和要求分为团队版和个人版,应严格按照模板执行(见附件1、2),团队版由团队负责人将成员姓名、班级、学号、分工及完成社会实践任务等情况填写清楚;
(2)参加团队社会实践活动的学生,除提交一份团队总社会实践报告(论文)外,每个队员还须提交一份不少于800字实践心得体会,作为评定成绩的重要依据;
(3)社会实践日志等佐证材料。
2.9月30日前,学生应将以上材料以班级为单位由学习委员按学号排序后,并附班级学生名单一份,交到各学院学工办审核;校、院实践队成员可直接由负责人汇总所需材料后提交所在学院学工办;学工办审核汇总后,应及时将评审材料和学生名单转交至指导老师处批改。
3.指导教师在评定学生社会实践报告(论文)成绩(尤其是团队)过程中,应积极征求各学院学工办的意见,做到公开公平公正;学生思想政治理论课社会实践成绩分为A(优秀)、B(良好)、C(中等)、D(及格)、E(不及格)五个等级,优秀等级的比例一般不应超过40%,不及格的也应严格控制,掌握好标准。
4.10月31日前,各指导老师应将批改完成的学生思想政治理论课社会实践成绩登分造册后录入学校成绩管理系统,并将学生成绩登记表交到教务办;同时,要按照2%比例从今年学生所撰写的社会实践报告(论文)中推选出优秀作品,在认真指导学生修改后,将电子稿发到__邮箱。
5.学生思想政治理论课社会实践报告(论文)成绩审定表可到校园网或__师范大学思想政治理论课教学网站、法政学院网站通知公告栏中下载。
6.思想政治理论课社会实践招标项目结题工作的有关注意事项如下:
(1)结题截止时间:2015年9月30日。
(2)结题要求:
①认真填写《__师范大学学生思想政治理论课社会实践招标项目结题鉴定审批书》(见附件3)。
②结题时须提交注明:“百校联百镇”思想政治理论课社会实践成果、__师范大学2015年思想政治理论课社会实践招标项目成果字样的总结册和调查报告(不少于8000字),调查报告格式和要求参照附件4。
③各个学院学工办应对审批书及相关材料进行认真审核,并签署意见。
(3)审批程序和办法
①在9月30日前,项目负责人应将《__师范大学学生思想政治理论课社会实践招标项目鉴定结题审批书》、总结册和调查报告各一式2份送交学院教务办(26幢教学楼二楼西头,联系电话:82298619),同时须将调查报告及审批书电子稿(注明招标项目名称和负责人姓名)发送至信箱。
②10月31日前,由学院组织专家组根据相关要求对申报材料进行审核和鉴定,并举行结题答辩会,通知另发。
③评审成绩为优秀的项目,作为重点项目结题;合格的项目,作为一般项目结题;不合格的项目,则由项目负责人组织项目组根据评审专家的整改意见进行进一步完善、修改,15日内重新提交结题成果和结题审批书进行再审,如获通过则作为一般项目结题,如仍未通过的,则予以撤项。