生物学论文范文

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1.2杨梅雌雄花序内部微观结构研究隔2d采集1次杨梅的雌雄花序，甲醛-乙醇-醋酸混合固定液（FAA）固定，之后进行常规石蜡切片及曙红染色。

1.3杨梅花粉萌发活力测定采用荧光染色法（FCR，fluorochromereaction），参照Sato等的方法略有改进。从即将散粉的花药中收集花粉，隔24h测定1次花粉活力，花粉活力测定过程中，设置3个重复，荧光显微镜下观察并统计花粉活力。

2结果与分析

2.1杨梅雄花生物学特征

2.1.1杨梅雄花序特征杨梅雄花序为柔荑花序，长1～3cm（图1-1），小花着生在主穗轴上，无花冠和花萼，小花主要由8～20枚花药组成，花药外面有2～3个苞片包裹（图1-2～4）。雄花序从花药形成到成熟散粉期间，其花药颜色依次经历暗红色、黄红色、鲜红色的变化。花药变成鲜红色后（图1-5），花丝伸长，花药进一步散开外露，开始散粉，通常是位于花序中下部位的小花先散粉（图1-6），随后其他部位的小花散粉。散粉过程中，花药二叉开裂，花粉较多（图1-7～8），散粉后的花药干枯脱落。

2.1.2杨梅雄花序显微结构及发育杨梅花药具有4个花粉囊，中部具有药隔（图2-1），花粉囊壁具有纤维层、中层和绒毡层3层（图2-2）。3月上旬，花药中的多数花粉母细胞处于减数第1次分裂前期（图2-2），3月中旬，则处于四分体发育时期，大部分四分体以四面体型存在（图2-3，淡色箭头所示），少数排列在一个平面上以十字交叉型存在（图2-3黑色箭头所示），故杨梅花粉母细胞胞质分裂主要以同时型为主，少量为连续型。3月中旬到4月初，由四分体分离出来的小孢子经过一系列的发育过程发育成熟，成熟花粉粒具有2个细胞核和3个萌发孔（图2-4）。

2.1.3杨梅花粉活力荧光染料本身不产生荧光，无极性，可以自由地透过完整的原生质膜，进入原生质后，与原生质内的酯酶作用形成一种能产生荧光的极性物质，荧光越强，表明花粉活力越强［20］。荧光染色结果表明：刚散粉的杨梅花粉染色活力非常强，在90%以上（图2-5），室温条件下放置24h后，对其活力影响不大，48h之后，其花粉活力急剧下降，仅有约69%的花粉具有染色活力，72h之后，约52%的花粉具有染色活力，96h之后，花粉荧光非常弱，几乎不具有染色活力。

2.2杨梅雌花生物学特征

2.2.1杨梅雌花序特征及发育杨梅雌花与雄花类似，为柔荑花序，长0.5～1.5cm（图3-1），小花着生在同一花序轴上，主要由柱头、花柱和子房3个主要部分组成，花柱极短，柱头两裂，呈“Y”状，小花外面有2～4个苞片包被（图3-7～10）。3月初，杨梅的雌花仍由苞片包被，整个雌花序成绿色（图3-2）。3月中下旬，杨梅雌花苞片展开，柱头开始外露，通常位于花序中上部的小花柱头最先显现（图3-3），随后，其他部位的柱头陆续外露展开，外露的柱头呈“Y”状张开不断向外生长，最后完全展开（图3-4～9）。与雄花序相类似，杨梅雌花序在发育过程中，其柱头颜色依次经历着淡红色—鲜红色—红色—深红色的变化过程，外部的苞片也经历着嫩绿色—黄绿色—中间绿色边缘微红色—绿色等不同程度的颜色变化过程。

2.2.2杨梅雌花内部微观结构杨梅子房为单心皮，1室，其底部与花托相连，其余部分均独立，属于上位子房（图4-1），胚珠各方向生长速度均匀一致，珠孔、合点和珠柄三者在一条直线上，在胚珠类型上属于直生胚珠，单珠被（图4-2～4）。珠被在发育过程中并非把珠心全部包住，而在珠心顶部留1个小孔，即珠孔（图4-5）。杨梅大孢子母细胞形成时，在大孢子母细胞外层有4～5层细胞包裹，因此在珠心类型上，杨梅属于厚珠心型（图4-6）。

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传统中国医学的系统决定着通过支队提取有效成分的方法，通过治疗的单一效果，对传统中药或者复方研究疗效进行评估，无法得到其本身所具有的本质属性。因此，传统中国医学的物理化学性质和生物活性，不单纯需要单一的药物与化合物，还需要进一步研究目标系统的反应规律之间的化学成分，以及人类的相关影响和协同的方法。在西方，研究中药的方法常常是拆迁测试，即通过解剖麻雀来发现活性成分的明显作用，但是却无法反映中药方剂在配伍方面的规则。因此，中国传统医学要想得到持续发展，不能仅仅局限在“全面”上，也不能单纯停留在提取活性成分的水平、纯化分离等层面，而是应该立足于中医理论，与研究现代生物医学的方法相结合，对于中国医药进行系统研究，以期建立起现代中医学理论体系。

传统中药复方充分体现了中医特有的整体观念和辨证治疗的整体理论，以君臣配伍理论为基础，通过药物的精选，全面调节平衡身体机能，发挥祛邪、标本兼治的功效。中国医药复方是传统中国医学的精华，传统中药的复合成分同人体之间呈现出复杂的非线性函数关系。中药复方的作用机理和整体评估兼容性的特性，必须要全面准确把握复合效应的整体性，传统中国医学与人体这两个复杂系统的相互作用，促成了一个更为先进系统的形成。传统中国医学理论只有在这一理念的指导下，与现代科学技术相结合，并发挥二者的相互作用，才能全面阐述中医的理论、作用机理以及治疗的物质基础。

传统中药复方具有对于各种有效成分进行协调的作用，针对器官、治疗目标、机体的生理和病理的不同，进行综合调控，发挥中药复方的综合作用。因此，研究传统中药复方应该从整体上进行，从而构建中国复合药品质量评价体系，这是很有必要的。因此，笔者基于化学基团理论，阐述复方中药的物质基础和分子作用机制，因为这样能够阐明兼容性的规则，有利于相应的中医辨证研究的开展。

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Palmer等在人类上皮细胞应用siRNA技术沉默Tctex-1发现，出现了比对照组wt-Tctex-1更长的纤毛，此现象与运用同样方法沉默动力蛋白重链-2（DHC2）导致的初级纤毛延长相似，同时发现，抑制DHC2会引起Tctex-1的伴随损失。相比单个亚基的沉默，DHC2和Tctex-1用siRNA技术双沉默能导致更长的纤毛。早期的研究表明，DHC2与中间轻链LIC3（D2LIC）特异性相互作用参与初级纤毛的形成和功能，因此，证明Tctex-1是纤毛长度的关键调节因子，且该过程可能是通过Tctex-1动力蛋白依赖[25]性途径实现的。T94磷酸化Tctex-1连接纤毛重吸收与细胞重新进入S期过程，添加外源性Tctex-1（T94E）突变体能加速细胞纤毛吸收并促使其进入S期；然而，在非纤毛细胞中Tctex-1不能促使细胞进入S期。研究表[26]明肌动蛋白参与了Tctex-1调控纤毛吸收过程。在Tctex-1连接纤毛重吸收和细胞重新进入细胞周期的过程中，胰岛素样生长-1（IGF-1）磷酸化细胞纤毛的IGF-1受体（IGF-1R），进而活化AGS3调节Gβγ信号通路，随后招募磷酸（T94）Tctex-1选择性富集到纤毛过渡区，促有丝分裂信号转导使纤毛重吸收进一步加速G1-S期进程。在皮质区干细胞中干扰这一途径的任何环节都将影响神经元细胞增殖时的成熟分化。在大脑皮质（duringcorticogenesis）中，纤毛传导的非经典IGF-1R-Gβγ–phospho（T94）Tctex-1信号通路通过调节纤毛重吸收和细胞周期[13]G1期的长短进而促进神经干细胞的增殖和分化。此外，有报道证明食欲素（OX-A,OX-B）参与睡眠-觉醒周期的调节，Tctex-1与食欲素受体1（OX1R）[27]相作用，进而调节OX-A信号传导。据报道Tctex-1参与人瘤病毒等感染引起的肿瘤发生过程，同时，Tctex-1也参与抑癌基因REIC/Dkk-3的信号传导，Tctex-1表达下调削弱了其对GEF-H1的抑制作用从而引发白血病。

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例如，课前安排学生收集课程资源，走进他们所生活、学习的社区和校园，调查栽培在他们身边的裸子植物和被子植物，拍摄这些裸子植物和被子植物的照片，收集它们的球果或果实。在拍摄和收集活动前，教师强调要爱护植物，最好收集自然脱落的球果或果实，不随意采摘或踩踏。课堂上展示收集到的资源，让学生将混杂在一起的裸子植物和被子植物的球果和果实分别挑出来，让大家分享成果，感受社区和校园环境的美，提高学生调查和观察能力，获取感性认识，初步学会区分裸子植物和被子植物。然后，让学生在家长的陪同下或以小组为单位，走进农贸市场，观察和收集舌尖上的课程资源，区分开市场上出售的裸子植物和被子植物，收集它们的种子和果实。课堂上展示所收集到的种子和果实，说出判断它们是裸子植物和被子植物的依据，交流在此调查过程中了解到的它们与周围生活的关系，让学生在日常生活中认识并能区分更多的裸子植物和被子植物，切身感受周围的生活离不开它们，形成关注生活、热爱生活、热爱家乡和自然的情感，增进亲情，培养合作精神和与人交流的能力，加深对裸子植物和被子植物的主要特征这一重要概念的理解，突出教学重点、突破教学难点。

上述活动可为每一位学生提供创新的机会，在参与活动中，让每位学生以自己独特的方式去调查、收集，将理论与实践相结合，获得直接经验;展示和交流时共享他人的资源，开阔全体学生获取资源的天地。

2加工课程资源，拓展教学内容

教材为适应不同地区、不同学校办学条件的差异和学生个性化、多样化发展的需要，在内容的选取上具有一定的弹性和灵活性。这为课堂教学中利用课程资源，创新课堂教学留下了自主的空间。围绕课堂教学目标，将收集到的课程资源进行加工处理，对教学内容进行合理拓展，能使课堂教学充满活力、灵性和创造性，发展学生的爱好和特长，让学生想学、乐学，获得可持续性的发展。

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2、结果

2.1耐药细胞的建立

SKOV3经300μg/ml大剂量的紫杉醇作用2h后,大部分细胞死亡漂浮，剩余细胞肿胀，伸出树枝状突起呈蜘蛛状，胞质见空泡形成、颗粒增多。少量存活的细胞克隆生长，恢复生长至对数期消化传代，再进行下一次冲击；SKOV3经10~30nmol/L小剂量的紫杉醇作用24h，约50%的细胞死亡，细胞体积增大，形态不规则，胞质内颗粒增多，贴壁性变弱，给药24~72h内最明显，96~120h后逐渐恢复原状。经两种诱导方法获得的耐药细胞系，分别命名为SKOV3/TAX300和SKOV3/TAX30。

2.2耐药细胞的生物特性

2.2.1耐药指数MTT实验结果显示，耐药细胞及其敏感细胞的IC50值及耐药指数，可见小剂量浓度递增诱导的耐药细胞SKOV3/TAX30耐药性较强，见表2。2.2.2平板克隆形成实验在无药物作用时，SKOV3敏感细胞较两种耐药细胞系的克隆形成能力强，见图1A的d组，SKOV3敏感细胞的克隆形成数为（934±16.37），SKOV3/TAX300的克隆形成数为（440±13.75）,SKOV3/TAX30的克隆形成数为（579±9.50）。与敏感细胞SKOV3相比，两种耐药细胞克隆形成数少，差异有统计学意义（P均=0.000），见图1B。而在相同浓度紫杉醇作用下，耐药细胞形成的克隆明显多于敏感细胞。在紫杉醇浓度为5nM时，SKOV3/TAX30可形成（1206±9.50）个克隆，SKOV3/TAX300可形成（870±32.30）个克隆，而SKOV3形成的克隆数仅（202±6.08），差异有统计学意义（P均=0.000）；当紫杉醇浓度进一步升高为50nM和500nM时，SKOV3/TAX30和SKOV3/TAX300形成的克隆数仍明显高于敏感细胞SKOV3。紫杉醇浓度为50nM时，SKOV3细胞与SKOV3/TAX300细胞形成的克隆数相比，差异有统计学意义（P=0.013）,SKOV3细胞与SKOV3/TAX30细胞形成的克隆数相比，差异也有统计学意义（P=0.000）；紫杉醇浓度为500nmol/L时，SKOV3细胞与SKOV3/TAX300和SKOV3/TAX30细胞形成的克隆数相比，差异有统计学意义（P=0.009、0.0001），见图1B。2.2.3生长曲线倍增时间的差异SKOV3敏感细胞和两种耐药细胞系在相同条件下培养7天，细胞增殖产生一定的差异。耐药细胞的生长较敏感细胞减慢，生长曲线的斜率减小，见图2。同时，根据生长曲线计算出SKOV3/TAX300和SKOV3/TAX30细胞的倍增时间分别为28.90h、24.0h，与敏感细胞的倍增时间20.84h相比也有所延长。

2.3耐药相关基因

MDR1、BCL2L1、LRP、PRKCA在各细胞中的表达MDR1、BCL2L1、LRP、PRKCAmRNA在SKOV3、SKOV3/TAX300和SKOV3/TAX30细胞中的相对表达丰度见图3A、3B。两种耐药细胞中，MDR1的表达明显增高，提示SKOV3/TAX300、SKOV3/TAX30对紫杉醇的耐药与MDR1高表达有关。SKOV3/TAX300细胞中PRKCA、LRP的表达均高于SKOV3细胞，差异有统计学意义（P=0.016，P=0.005），BCL2L1的表达与敏感细胞比较，差异无统计学意义（P=0.815）。而SKOV3/TAX30细胞的PRKCA、LRP的表达与敏感细胞比较差异无统计学意义（P=0.154，P=0.206）。BCL2L1的表达低于敏感细胞（P=0.001），见图3B。以上数据表明不同诱导方式导致耐药细胞发生不同生物学变化，可能存在不同的耐药机制。

2.4耐药细胞的保存

耐药细胞SKOV3/TAX30分别冻存在含有0、10、30nM紫杉醇的冻存液中，于冻存后1、3、6月复苏，检测IC50，见表3。1、3月后检测结果提示，在3种药物浓度条件下的细胞IC50没有明显区别，但冻存6月后，无药冻存组的耐药细胞与两种加药冻存组的细胞比较，其IC50明显下降，差异有统计学意义（P<0.01）。同一个药物浓度条件下，无药冻存组的耐药细胞在冻存6月时，出现耐药性下降，而两种加药冻存组细胞在6月的冻存过程中，细胞IC50虽然出现轻度下降，但差异无统计学意义。

3、讨论

3.1耐药细胞的建立

本实验结果提示：增加给药剂量、适当延长无药间歇期，可能延缓细胞的耐药性。由于大剂量冲击诱导与临床治疗模式相似，临床上体内耐药指数≥2倍即足以导致化疗失败[5]，因此大剂量冲击诱导产生的耐药细胞虽然耐药指数较低，也是模拟临床耐药的良好模型。

3.2耐药细胞的特性

本研究的结果表明：在无药物作用时，SKOV3细胞的集落形成能力强于两种耐药细胞SKOV3/TAX300和SKOV3/TAX30，但在不同浓度紫杉醇药物条件下，耐药性最强的SKOV3/TAX30集落形成能力也最强，而敏感细胞SKOV3的集落形成能力最弱，此结果与MTT法检测的耐药性一致。紫杉醇的作用机制是促进微管蛋白二聚体装配成微管，抑制纺锤体形成，将细胞阻断于G2/M期，细胞的有丝分裂异常或停止，使多核细胞的形成增多[6]。诱导的过程中耐药细胞膨胀、形态不规则、细胞体积的增大可能与细胞群体中多核细胞的增多有关。本研究的生长曲线实验中，SKOV3/TAX300和SKOV3/TAX30的倍增时间分别为28.9、24.0h，与敏感细胞SKOV3的倍增时间20.84h相比有明显延长，显示耐紫杉醇的卵巢癌细胞生长速度减慢。细胞周期的阻滞，除导致一些细胞周期特异性药物失效外，肿瘤细胞处于相对静止状态，易对化疗药物产生耐受。

3.3耐药相关基因的检测

卵巢癌紫杉醇耐药机制的研究中，多药耐药（multidrugresistance，MDR）一直是热点。多药耐药是指对一种药物具有耐药性的同时，也对其他结构和作用机制完全不同的化疗药物产生交叉耐受的一种现象。多药耐药的产生是一个多因素的过程，主要包括：（1）细胞内有效药物浓度的降低；（2）细胞内药物活性的改变；（3）凋亡的抑制；（4）肿瘤细胞微环境改变化疗敏感度。P-gp是多药耐药基因MDR1编码的相对分子质量为17kD的一种跨膜糖蛋白，其功能是使细胞内药物浓度降低，药物的作用减弱或丧失，细胞由此获得耐药性。与大多数其他化疗药物的多药耐药机制相似，紫杉醇作为P-gp的作用底物之一，其耐药机制与MDR1基因扩增导致的P-gP高表达密切相关[7-8]。肺耐药相关蛋白LRP是在多药耐药的肺癌细胞株中发现的与MDR相关的非糖蛋白，相对分子质量为110kD，能阻止药物通过核孔进入细胞核，避免其作用于核内靶点，药物运送到胞质的囊泡中，再通过胞吐作用将药物排出体外，从而发生紫杉类药物耐药[9-10]。凋亡抑制基因也参于紫杉醇耐药。BCL2L1基因，全称为BCL-2样1基因（BCL-2-like1）,编码蛋白属于BCL-2蛋白家族，BCL-2蛋白家族通过抑制肿瘤细胞凋亡，导致耐药性[11-12]。PRKCA基因为蛋白激酶Cα（proteinkinaseCalpha），也被称为PKCA、PRKACA、KPCA、AAG6。细胞过度增殖和抗细胞凋亡机制障碍都可导致肿瘤进展和耐药现象发生[13]。另外PKC的作用是使底物蛋白磷酸化而活化，p-gp是PKC的作用底物，当其表达增加或活性增强时，可使大量的P-gp磷酸化而活化，从而产生耐药性。本研究结果提示。SKOV3/TAX300细胞PRKCA、LRP的表达均略高于敏感细胞。但SKOV3/TAX30细胞的PRKCA、LRP的表达与敏感细胞比较差异无统计学意义。BCL2L1在SKOV3/TAX30细胞的表达低于敏感细胞，但SKOV3/TAX300细胞中BCL2L1的表达略高于敏感细胞，结果提示不同方式诱导的耐药细胞，可能存在不同的耐药机制。

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1．2肝细胞标志基因的检测按照总RNA提取试剂盒的操作说明分别提取hUC-MSCs和人肝癌细胞HepG2的总RNA，用RNase-FreeDNaseⅠ去除基因组，最后检测RNA的浓度和纯度，立即进行反转录合成cDNA或保存于－80℃备用。采用Prime-ScriptTMⅡHighFidelityRT-PCR试剂盒反转录2μgRNA得cDNA，取2μL用于PCR。根据GenBank提供的人肝细胞标志基因序列，使用PrimerPremier5．0软件设计引物，引物序列和产物大小见表1。GAPDH为内参对照。PCR反应条件:94℃预变性5min;94℃变性30s，56℃退火45s，72℃延伸30s，30个循环;最后72℃延伸5min。PCR产物用20g/L的琼脂糖凝胶电泳，在凝胶分析系统下拍照。

1．3PAS糖原染色按照PAS染色试剂盒的说明书操作，对第5代hUC-MSCs和HepG2进行糖原染色，在倒置相差显微镜下观察并照相。

2结果

2．1hUC-MSCs的分离、培养、传代及鉴定组织块贴壁培养3～4d时，可观察到组织块间隙铺展出小三角形或长梭形的细胞，继续培养至7d左右，可观察到局部细胞呈集落生长，此时，在无菌条件下取出组织块，更换新鲜培养基，继续培养1周左右，细胞可达80%～90%汇合，即可传代。用胰酶/EDTA消化后细胞呈亮而圆的单个分散状，以1∶3的比例进行传代，约4h贴壁，2d后迅速生长。倒置相差显微镜下可观察到细胞较大，轮廓清楚，内部有清晰的应力纤维，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显，呈典型的成纤维细胞样形态(图1A);持续培养大约2周时，细胞基本达到完全汇合，形态发生一定的变化，胞质变得狭窄，内部的应力纤维也不明显，呈平行排列或漩涡生长(图1B)。连续多次传代，细胞保持稳定的、相对均一的成纤维细胞样形态以及较强的增殖能力。经鉴定分离培养的细胞CD44呈阳性表达，且具有良好的均质性。

2．2肝细胞标志基因的表达以HepG2作为阳性对照，用RT-PCR检测hUC-MSCs的肝细胞标志基因的表达情况，结果见图2，hUC-MSCs表达ALB、CK18、G6P、GLUL和MET，不表达TAT。

2．3PAS糖原染色结果对hUC-MSCs和HepG2进行PAS糖原染色，染色结果显示两种细胞的细胞质中均有紫色颗粒物形成，即均呈糖原阳性反应(图3)。

3讨论

MSCs能分泌多种细胞因子和生长因子，具有直接或间接的抗炎及抗纤维化作用，可抑制肝细胞的死亡和纤维化;还可通过其分泌物抑制肝细胞的凋亡、刺激肝细胞再生、为受损肝细胞提供营养支持等。MSCs还具有低免疫原性及免疫抑制力，适用于进行同种异体移植，在移植后可迁移、归巢至受损的组织，发挥治疗作用。因此，MSCs在肝脏疾病的细胞移植治疗中具有广阔的应用前景。研究发现，相较不同来源的MSCs，脐带来源的MSCs不仅具有干细胞的特性，而且来源丰富、取材方便、增殖能力较强、无伦理法律限制，还具有较低的免疫原性和分化程度，从而成为一个非常有吸引力的移植治疗肝病的细胞来源。

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2结果与分析

2．1病原菌生物学特性观察

2．1．1温度和pH值影响

试验结果看出，在PDA培养基上槟榔炭疽菌菌丝生长的温度范围是10～40℃，最适生长温度25～30℃，低于5℃或高于40℃均不能正常生长。该菌在15～30℃均能产孢，最适产孢温度25℃，产孢量最多。pH值4～11时槟榔炭疽菌在PDA培养基上均能生长和产孢，菌丝最适生长pH值6～7，pH值大于4的条件适宜产孢，pH值＝6产孢量最大（见表1）。pH值对菌丝生长和产孢的影响一致，酸性偏碱的条件适宜病菌的生长和产孢。

2．1．2不同碳源、氮源的影响

试验结果看出，不同碳源培养基上，槟榔炭疽菌菌落生长及产孢量明显不同。7种供试碳源的菌丝生长均优于对照，除D－半乳糖外，其他碳源的菌落直径均大于对照，说明碳源对槟榔炭疽菌菌丝生长具有促进作用。海藻糖的菌落直径最大，长满整个平板，且菌丝生长旺盛；其次为可溶性淀粉，菌丝生长茂密。碳源对槟榔炭疽菌的产孢量影响差异较大。除可溶性淀粉、D－果糖、甘露醇的产孢量大于对照外，其他供试碳源的产孢量均低于对照。可溶性淀粉的产孢量最大，D－果糖次之。8种供试碳源中，可溶性淀粉适合槟榔炭疽菌生长和产孢，可作为槟榔炭疽菌的培养碳源。不同氮源对槟榔炭疽病菌菌落生长及产孢的影响差别较大。以硝酸钾和脲为氮源时，菌落生长最快，菌丝生长旺盛，且产孢量也最大；硝酸钠培养基的菌落生长旺盛，但不产孢。以硫酸铵、氯化铵、硝酸铵为氮源的菌丝生长及产孢均明显受到抑制。在无氮培养基上，菌落直径最大，但菌丝极少，接近透明且不利于产孢（见表2）。

2．2杀菌剂的抑制作用

试验结果看出，6种杀菌剂对槟榔炭疽病菌菌丝生长的抑制作用差异较大（见表3，图1）。咪鲜胺抑制作用最强，其次为苯甲•丙环唑，代森锰锌、十三吗啉的抑制作用较弱，不适用于防治槟榔炭疽病；甲基托布津、多菌灵对槟榔炭疽菌基本上无抑制作用，不能用于防治槟榔炭疽病。

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    教学方法的选择应根据不同的认知对象、不同的学科、同一学科的不同内容从而选择不同的方法,但不管采取何种教学方法,关键在于把课上活,充分调动学生参与教学的积极性。因而根据教学内容的不同,我们采取了多种教学方法。如对于细菌的形态和结构这一章节内容,采用直观的多媒体教学可以让学生形象地看到各种细菌的形态、基本结构及特殊结构;在细菌各论部分,选取部分教学单元由学生自主教学。教师事先根据教学目的、教学内容提出授课提纲、学习重点及难点并确定人员分组。小组成员细致分工、相互协作,在课后完成资料素材收集及教学课件的准备。在此期间,教师与学生进行充分沟通,及时为学生排疑解惑,引导学生在教学大纲的框架下安排课堂讲授内容,并传授讲课技巧及注意事项。同时设计《学生自主学习实践评价标准》,由学生从教学内容安排、课件制作、语言表达等多方面互相进行评议、分析和总结,教师最后进行点评总结。这种教学方式一方面活跃了课堂气氛,加深学生对所学知识的理解,增强了学生的团队意识,另一方面也可以让教师在与学生的互动中、从学生独特的视角中发现许多平时不会思索的问题;在学习引起人类疾病的常见病毒这一部分内容时,采取专题讨论方式进行学习。专题讨论式学习由教师提出专题,分组学生在本专题内提出应深入讨论的问题,查资料,作综述,课堂进行讨论。例如“人类免疫缺陷病毒”的讨论式教学,学生提出一系列问题,如HIV-1感染的分子机制及免疫反应、T细胞功能受损的疾病、HIV疫苗的研究等,经过讨论,不仅全面完成了教学内容,而且为学生提供了一次“综述训练”的机会,教学效果令人满意。此外,作为一门与临床学科关系十分紧密的基础课程,我们在教学过程中十分注重微生物学知识的临床应用,采用PBL教学法将临床病例分析引入课堂讨论教学,由病引入菌,菌中解析病,菌病结合,解除病菌。如此,在整个讲授过程中就将病原微生物的生物学特性、致病物质与致病机制、检查及防治原则讲解清楚。

    3反映前沿,开阔视野,培养学生创新能力

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1.1注重教学改革与创新进一步明确师范生培养目标，推进课程体系建设与改革，追踪专业前沿，及时更新教学内容，不断加强本课程群的教材和实验室建设；不断探索实践性教学方法和手段，创新师范生职业技能实训模式，有效提高教学质量和教学效果。

1.2构建师范生教学技能训练体系针对教师教育技能的具体要求和内容，构建师范生教师教育综合技能实训教学体系，将课程体系调整为学科专业基础课和教师教育课程两大方面。

1.2.1调整学科专业基础课，完善师范生专业知识体系学科专业基础课是师范生专业知识体系的基础，所涉及课程科目围绕中学生物所涉及到的植物生物学、动物生物学、人体解剖生理学、生态学等课程以及高中生物学必修模块强调的分子与细胞、遗传与进化、环境和稳态等内容开设，根据中学生物课程的知识重点和比例，设置专业课程结构，使师范生在本科学习过程中，便能形成比较完整、系统的学科知识体系。

1.2.2设立教师教育课程，加强学生教学基本技能的培训教师教育课设立公共教师教育课群和生物学科教师技能课群，前者包括心理学、教育学、现代教育技术、教育心理学、班级管理学、汉语口语、教师礼仪学、学科教学论、微格教学及教学技能训练、三笔字等常规课程，加强学生教学基本技能训练，如微格教学训练、教师口语训练和说课训练、三笔字训练、教学设计训练；同时设立生物学科教师技能课群，中学生物学实验设计与探究、生物学经典事件解析、中学生物学教学案例分析、生物科学与社会生活等课程，进一步提高教师的生物知识素养。

1.3注重学生现代教育技术教学技能训练包括现代教育技术、多媒体软件制作、网络课程创建、教学动画创作和DV创作等实验。让学生运用现代教育理论和现代信息技术，通过对教与学过程和教与学资源的设计、开发、利用、评价和管理，以实现教学优化的理论与实践。

1.4加强教育教学技能训练实践建立贯穿大学四年的循序渐进的系统性教育技能培训体系，根据本科生四年的学习进程分别安排教育调查、教育见习、教育服务、教育实习等教育实践环节，强化师范技能和实践训练，提高学生的师范性素养。

1.4.1延展教育实践时间，丰富实践教学内容一至三年级增加教育调查、教育见习、教育服务，定期组织学生参与到中小学教育中去，进行教学观摩，加强听课训练和教学技能的训练；熟悉教育环境，观察教师学生的活动；充当课堂教师的助手，指导学生开展课外活动，辅导个别学生或学生小组，批改学生作业；同时，要求学生实践期间对中学的情况进行调查与研究，撰写出教学研究论文，相互交流[7]。通过丰富的教学实践活动让师范生充分了解学校、教师和学生、教学过程，以及师生之间的关系，使学生提前进入教师角色。

1.4.2加强教育实习活动，全面开展教育实践活动培养学生运用大学四年学习到的教育理论、基本技能和专业知识，去独立分析和解决实际问题的能力，把理论和实践结合起来，提高实践动手能力，为毕业后走上工作岗位打下一定的基础；让师范生尽早了解当今社会对教师教学技能的具体要求和内容，通过在社会实践中接触与本专业相关的实际工作，增强师范生感性认识，培养和锻炼综合运用所学的能力。

1.5延展教育教学技能的训练由于课时等各类因素的限制，培养师范生教学技能过程中存在着学生课堂讲授学时少、技能训练时间少的状况。因此要按照“优化课内、强化课外”的原则，为学生提供更多实训的时间和空间，加强实验和训练环节。组织指导师范生进行各项教师职业技能训练和比赛，定期开展教师职业技能竞赛，推荐师范生参加更高一级的高校师范生教师职业技能竞赛。各种社会实践、社团活动和学校组织的各种大赛活动等也是有效的实践环节。积极组织和支持学生课余开展各项技能培训及比赛活动，比如“教学技能”、“说课”、“模拟上课”、“三笔一话”、“书法”、“多媒体课件制作”等大赛，同时“班级网页设计”、“教师形象”、“朗诵”、“演讲”、“辩论赛”等一系列的大学生校园活动比赛也是很好的培训方式。这些培训与比赛活动有利于培养学生的基本技能，也提升了学生的人文素养。

1.6教学案例资源建设规范，建立网络资源库“教学案例资源”是指中小学教学案例、微格技能实训等案例的资源包。资源包应包括教学单元内容及教学设计方案、教学单元的课件及学生作品等、教学单元的视频录像、教学反思（实训总结）与专家点评等四个部分。特别是名师授课的课堂案例，定时组织学生进行观摩。通过丰富的“教学案例资源”的学习，了解各种教学思想、教学理念和教学模式，提升师范生的教育教学技能。

1.7在中学建立长期的教育实践基地，带动师生服务基础教育

1.7.1注重高校教育与基础教育的对接加强与实习中学的合作研究，注重教学与基础教育新课改的对接，组织师生走向基础教育一线，通过听课、实习见习指导、开设讲座、联合开展课题研究等各项活动，开展教育教学实践活动。学生在实际的教学实践中不仅可以早日进入教师角色，明白教师的责任，还可以了解现代中学生的特点，并发现自己在教学中的优点和不足，有助于在今后的学习中有目的地提高自身的教学技能。同时，邀请中学优秀一线教师来学校作报告传授教学技能，以及在实际教学中遇到困难和突发事件时的解决方法，并亲自指导学生的教学，提高教学技能。

1.7.2与实践基地建立互惠关系积极为实践教学学校的教育教学改革与发展提供新知识、新技术、新信息指导，提供师资培训、仪器设备的使用及图书的借阅等服务和帮助。向实践基地师生免费开放生物标本馆，对基地教师进行生物新课程及实验培训，共同承担实践教学与基础教育方面的研究课题并共享研究成果等。经常派学生到基地帮助开展一些有意义的活动，如课外辅导、义教、指导中学生开展生物与社会等方面的研究性学习等。

1.8注重高校教师自身的师范性影响从更加广义的师范生教师职业技能培养而言，不能将师范生教师职业技能训练局限于几门课程上，每一位高校教师在课堂上都是一种最真实的“示范”。教师教育课程教师、学科教法教师、专业课教师等各个课程教师的教育态度、教学能力、教学风格、知识面与基本功等教师职业技能无疑都潜移默化地影响着学生，甚至这种影响更深刻，产生的积极效应和潜移默化效果是显而易见的。

1.9积极进行师资队伍建设建立一支稳定的、有丰富教育理论和实践经验的教师队伍。对教师进行多渠道培训，使其具有丰富的教育理论知识，熟悉中学生物教材，了解课程标准，掌握课程改革的趋势。注重青年教师培养，不断提升教师队伍整体水平；适时吸纳青年教师和具有丰富实践经验和学术水平高的人才，建立合理的教学梯队结构，确保教学团队的可持续发展。注重青年教师培养，组织有经验的教师对其讲授内容、教学方法等进行评议、指导、鉴定。通过教学团队内的传、帮、带，提高教师队伍整体教学水平。

1.10加强教研室教学研究活动开展形式多样的教研室教学研究活动，促进教师业务能力的不断提高。组织教研室教师进行听课评课活动，以期探索课堂教学最优方式，提高课堂教学效率。日常注重教法、学法的教科研学习，把搜集来的先进教改信息反馈给教师，用先进的教学理论指导教学；使每位教师都能遵照学院的教学实施计划，增强课堂教学的目的性和计划性。

1.11建立全面合理的评价体系成立生物专业教师职业技能训练团队，从知识与从教技能等方面考核和评价学生的教师教育技能培训。多方面、多角度探讨和建立学生学习成绩的综合评价体系，全面衡量学生的实践技能与创新能力，促进学生全面发展。

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病原生物学包含医学微生物学与人体寄生虫学2门相关学科，是医学人才培养课程体系中一门重要的专业基础课川。实验课是病原生物学教学的重要组成部分，实验教学的质量直接影响着这们课程的整体教学效果。传统的教学模式中存在重理论讲授、轻实践操作的现象。学生缺乏动手能力和开拓创新精神，很难适应素质教育的需求。我们经过长期的教学实践，深切的体会到只有强化病原生物学实验课各个环节，采用经典与创新结合的教学方法，传统与现代并用的教学手段，才能有效地提高教学质量。

一、实验教学内容的优化、改革

根据专业培养目标和学科发展的要求，制定实验教学大纲和教学计划，编写实验教材、优化教学内容，注重培养学生的综合能力，改革单调的演示验证性实验。逐步开设综合性、设计性实验，激发学生创新意识，锻炼、培养学生独立操作及分析和解决问题的能力。

二、培养学生严谨求实的科学态度及作风

每次实验课前，首先让学生充分预习实验内容，实验过程中教师应帮助学生建立“有菌观念”，养成“无菌操作”的良好习惯。及时纠正错误，规范实验操作，实验课上一定要强调“眼见为实，实事求是”的重要性，强调实验结果的准确性。对于实验报告中抄袭实验讲义，编造实验结果，不讲求实事求是的现象要予以严肃批评教育，同时也和未获得预期结果的学生一起探讨原因，营造切磋研讨，教学相长的机会和氛围。在实验教学中潜移默化地培养学生求精敬业的医学职业道德，为以后科研及临床工作奠定良好的基础。

三、强化技能训练

实践技能训练是培养学生综合能力最有效的途径，我们在强化技能训练的同时，将能力培养和态度培养贯穿于实践教学的始终。如显微镜油镜的使用、革兰染色法与抗酸染色法操作、细菌的培养与鉴定技术等。对锻炼和培养学生的精细动作，细致的观察力及一丝不苟、精益求精的工作态度等都极为重要。通常一个完整的实验过程，涉及实验设计、操作步骤、结果观察、报告书写等方面，教师要充分利用实验教学过程中的每一个环节，切实加强学生综合能力的培养。

四、培养学生动手操作能力

4.1明确实验目的首先向学生阐述实验目的，鼓励其亲自动手，独立操作。

4.2将社会实践融人到实验教学中在教学过程中，针对一些常见病原性疾病的实验诊断方法进行相关实验诊断和检测。如学生应用透明胶带法自行检查蠕形蜡感染;应用粪便生理盐水涂片法检查蠕虫卵;应用酶联免疫吸附试验等方法对自身血清中的乙型肝炎、丙型肝炎抗原、抗体进行检测。因为这些实验都是检测自己的感染情况，所以学生实验操作都非常认真，实验过程中既掌握了操作技术，又深刻体会了实验技术在临床实际工作中的应用，同时学生在实验中对自身的健康状况又有了进一步的了解，极大地激发了实验兴趣。

4.3发扬团队协作精神对部分需要多人共同完成的实验，实行小组长负责制，实验小组成员之间相互协作，密切配合，要求在最短的时间内完成实验，训练学生的组织能力和团结协作能力。

五、充分利用多媒体教学手段。提高实验教学效率

多媒体教学是将文字、图形、动画、视频、声音等多种信息加工组合在一起来呈现知识信息。多媒体突破了微观限制，帮助学生加深理解教学内容，将不易单纯用语言表达清楚的抽象复杂的理论直观地表现出来，变抽象思维为形象认识，使教学内容生动形象。病原生物学实验有一些内容以模式图和实物标本难以展示，应充分运用现代计算机多媒体进行辅助教学，激发学生的求知欲望和实验兴趣。比如在讲解用悬滴法进行细菌的动力测定时，学生经常无法找到正确的视野，除了显微镜使用原因之外，更多的是学生对细菌运动没有直观的认识。为此，我们特意制作了常见细菌的动力学观察视频资料，学生在短短的几分钟时间内对细菌的运动和显微镜的使用便有了初步的认识，操作和观察效率大为提高，激发了学生自主学习兴趣，教学效果也有了显著提高。

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2教学反思

本节实验课教学获2012年全国中学生物课堂实验教学展示一等奖，在其教学准备和教学实施过程中得到了省市多位专家和同仁们的帮助，也得到了学生们的支持。回顾这段过程，倍感辛劳和快乐，其中主要心得如下。

2.1教学困惑

困惑之一：如何在实验室顺利完成此实验？蚂蚁的行为是非常复杂多变的，将蚂蚁捕捉到实验室进行探究实验，发现蚂蚁受到惊吓、失去巢穴等因素的影响，蚂蚁的行为发生了改变，常常没有出现实验设计中预料的结果。如何在实验室模拟自然环境，探究蚂蚁在最接近自然状态下的觅食行为？在自然界中直接观察蚂蚁行为是否可行？困惑之二：如何提出有价值的探究问题？提出问题是科学研究中至关重要的环节，提出问题是探究的起点，也是产生智慧的萌芽。在教学中，教师常常重视解决问题，而忽视提出问题。李政道先生曾说“：求学问，需学问，只求答，非学问。”教师应该向美国妈妈学习：“孩子，今天上学了，给老师提两个好问题！”如何通过教师的精心设计和巧妙指导，让学生提出有价值的探究问题呢？困惑之三：如何科学评价学生探究能力？评价是一种重要的激励手段和发展机制，同时实验评价能力也是教学目标的重要组成部分，但是很多教师在教学中将其遗忘了。关于本节课的教学，教师们都习惯于实验方案的设计，其实验方案的可行性缺乏了实践的检验，实验教学中没有组织评价，从而失去了进一步提升的空间。如何有效评价学生的科学探究能力，进一步激发学生学习的主体性和主动性？这也是萦绕在心头、挥之不去的困惑。

2.2创新之处

对本节课进行创新的宗旨在于让实验教学由基于传递到基于发现、由静态构成到动态生成、由个体思维到集体智慧，为此需要激发内在学习动机、开放实验领域、构建反馈激励机制、提供集体学习支持。

2.2.1在实验方法上进行了创新选择实验场所：笔者经过反复实验后认为，本实验在实验室中进行难以得到可靠可信的科学数据，因为蚂蚁从野外被捕捉到实验室由于受到惊吓而逃生或首先忙于筑巢等过程，根本无暇顾及觅食。学生按小组分别在实验室内和室外进行探究实验，在实验过程和数据对比中得出结论，即蚂蚁在自然状态下的觅食行为更真实，效果更明显。最终本实验的实验过程选择在校园内进行，其余过程在实验室进行，既保证了实验的真实性，又确保了实验的有效性。开放生物学实验内容：教材上提供的实验方法是在实验室内完成本实验，教师没有按照教材上内容进行。根据课程标准精神，倡导学生开展开放性、自主性的探究学习，力求将课堂还给学生，让学生成为学习的主人。如利用蚂蚁工坊观察日本弓背蚁的行为和探究它们的觅食行为，实验的自变量并拘泥于食物的颜色倡导合作探究：启发学生相互学习，如食物同方向、等距离摆放在蚁穴洞口；每种食物要有一定的距离且边界要清晰；不同的实验处理应贴上标签，以利于观察和记录；食物进行特殊处理：设置对照组和实验组；配备绘图员、拍照员等，带上记时秒表，用表格记录数据结果。其实，科学探究的过程、技能、方法等，通过学生之间的学习与实践来获得，比起教师的刻板说教更有趣、有效。

2.2.2在实验评价上进行了创新为评价而教学，还是为教学而评价？在设计实验评价时必须对此做出抉择。为教学的评价，关注的是评价如何生成教学价值，而不是教学如何应对评价。为此，笔者将主体性、激励性和发展性作为实验评价的价值取向。学生完成本探究实验的热情较高，教师通过课题研究，明确科学探究能力的主要能力结构，依据具体的科学探究任务，确定相对应的科学探究能力评价细则，统计和分析学生在探究中的各种能力的现状，对学生科学探究能力的过程性评价研究。一方面可以促进教师反思教学设计，提高教学目标的针对性；另一方面可以客观记录学生在探究活动中的表现，利用评价和交流促进学生的发展。通过定性和定量评价，评出最佳生物学实验小组，评价每一位学生的探究能力。创新之一:学生评委进行评价。为了在实验评价上实现多元化、多主体，我们还组织了促进学生之间的他评与互评。考虑到初中学生的认知水平和评价能力有限，加上实验评价的复杂性，教师选取了部分优秀生担任评委，并对学生评委进行适度指导和培训。事后发现，对学生评委培训非常重要，同时在培训中也促进了优秀学生的进一步发展，因为培训的过程也是一次分层教学与学习的过程。创新之二：教师进行延时评价。实验教学完成后，教师可以实施延时评价,对学生评价采用工作单的形式。教师延时评价的主要依据是学生填写的工作单和学生评委意见，有效解决克服了教师一人无法现场观察全班学生实验行为表现的问题。学生评委和教师延时评价指南。

2.2.3在实验拓展上进行了创新

①拓展了实验内容、激发了探究欲望。学生在探究蚂蚁的觅食行为过程中，不断出现新现象、提出新问题：如蚂蚁喜欢吃什么？蚂蚁的觅食与食物的气味、颜色和形状有关吗？如何通过实验证明蚂蚁觅食行为与某种因素有关？蚂蚁喜欢肥肉还是精肉？蚂蚁通过眼睛还是触角觅食？蚂蚁将食物存放在蚁穴的什么位置？在觅食过程中蚂蚁怎样交流信息？蚂蚁为什么要争斗呢？蚂蚁繁殖期会出现哪些繁殖行为呢？蚂蚁社群生活是一幅什么样的场景呢？不同蚂蚁之间又有哪些不同的行为表现呢？在生物学实验设计上如何减少实验误差？上述问题是实验后学生提出的问题，这些问题必然点燃学生智慧的火花。

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二、研究设计

（一）语料来源

收集河南师范大学生命科学学院2008届至2014届研究生（以下称“学习者”）的硕士毕业论文英文摘要，建立生物学硕士学位论文摘要语料库（以下简称BMAC）。从Science、Nature、Cell中筛选作者为本族语者的生物学论文，建立英语本族语者生物学论文摘要语料库（以下简称NSAC）。

（二）研究问题

本研究基于语料库证据，主要调查以下两个问题：1．BMAC和NSAC两个语料库中连接词的使用频率有无差异。2．在表达某种语义关系时，学习者与本族语者使用连接词的情况是否有差异。选取“but”，结合其在两个语料库中的分布情况来回答第二个问题。

（三）研究方法

本研究采用中介语对比分析方法，所调查的连接词参考了Granger［9］调查的连接词表，并与现实教学相结合，确定了以and、because、but、forexample、forin－stance、furthermore、however、inaddition、infact、hence、indeed、nevertheless、notonly…butalso、ontheotherhand、so、then、therefore、though、thus、while为研究对象。具体研究步骤如下：第一，借助语料库检索工具Wordsmith5．0对上述20个连接词在BMAC和NSAC中逐一检索，获取其出现频数。第二，对频数进行标准化处理，得到标准化频率。第三，利用卡方检验计算器对数据进行卡方检验，用来测试两组数据之间是否存在显著性差异。第四，处理数据并分析讨论。

三、结果与讨论

（一）观察两个语料库中连接词使用的总体差异。从表2可以看出，在总体频率上，学习者使用连接词的频率高于本族语者。学习者每100000词使用了2771．2个连接词，而本族语者只使用了2034．5个。我们从以下三方面来分析原因：第一，在英语教学过程中，教师过于强调要使用连接词，使学习者误认为只要在写作中使用足够的连接词就能使语篇连贯、逻辑清晰。第二，学习者并没有全面掌握英语写作知识，以为只有使用连接词才能达到语篇衔接，忽视了语义衔接和句法衔接等手段。第三，学习者为了使读者更清晰地理解，刻意将句子之间的语义或逻辑关系明白无误地标记出来。我们对学习者进行了访谈，学习者普遍认为，使用连接词可以使文章看起来条理清晰、逻辑性强，而且在写作过程中更有利于组织语篇。

（二）从表3和表4中可以看出，学习者对某些连接词，如but、so、forexample、notonly…butalso等使用频率过高。通过观察不难发现，这些单词都只适用于非正式文体的句间连接，较少出现在正式的学术论文中。“so”的使用频率高达315．4，在BMAC中位居第三。“notonly…butalso”在BMAC的使用频率是NSAC的10倍，“but”在BMAC中经常被重复使用。这些现象体现出学习者能够灵活运用的词汇数量有限。从表2的数据可以看出我国英语学习者使用了用于正式文体的therefore，但在英语正式文体中，表示因果关系的连接词还有thus、hence等，这些表示因果关系的连接词在BMAC中的使用频率远低于本族语者。这也反映了学习者对连接词的选用受到语言能力的限制。学习者使用频率很高的连接词（如but、so、forex－ample等）大多简单易学，口语化特征明显。从习得顺序来看，它们要先于hence、nevertheless、forinstance等词，学习者倾向于使用最先习得的简单词汇。从表4可以看出，位居第一的偏少使用的连接词是and。这一特征可能是由于学习者受到了汉语的影响。英语表达合取关系的词语为and，汉语中主要是“和”，英语的合取连接词只要求所连接各项的语法平行性，而“汉语的合取连词不仅要求所连接的两项在语法上是平行的，而且还有严格的词性和语言单位层级的限制”［10］。所以受到汉语中“和”的使用条件的限制和影响，学习者在可以使用and时往往会选择其他词汇或句法手段来表达。在偏少使用的连接词中，有两个是转折性连接词（however、nevertheless），这与Granger和Tyson的发现相符：“那些表转折意义（如however）以及使论述向前发展的连接词都有使用不足的迹象。”［11］

（三）BMAC和NSAC中出现频率最高的连接词均为and，这是由and本身所表达的语义所决定的。正如Quirk所说：“英语中的and是含义和用法最广的并列连词。”and的表层结构表现为并列，但结构深层却含有多种不同的逻辑语义关系，例如因果、顺序、对比、强调、增补等，因此，无论是学习者还是本族语者都会经常使用。位居第二的分别为but和however，这两个连接词都是具有转折功能的连接词，这说明在表达“转折”这一具体语义时，学习者和本族语者有着不同的选择偏好，学习者倾向于使用but，而本族语者却倾向于however。观察BMAC语料库中的索引行，我们发现：95．9％的but被用于句首，连接上句并引出下文，语义关系较为简单，具备转折的功能。观察NSAC语料库，发现however一词92．1％也都是用于句首，用来表示转折。however是正式文体中常用来表示转折意义的连接词，而在非正式文体或口语中经常使用but来表达同样的意义。Biber曾指出，therefore带有浓厚的书面语色彩，而but则带有浓厚的口语色彩［12］。but在BMAC中出现的频率远高于在NSAC中出现的频率，表明中国学习者语体意识薄弱，在正式的文体中经常使用明显的带有口语化特征的词。这也表明书面语中的口语化倾向是中国英语学习者英语学习中存在的普遍问题［13］。