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职工在两个及两个以上用人单位同时就业时,各用人单位应当分别为其缴纳工伤保险费,在哪个单位出了工伤,就由哪个单位依法承担责任。劳动保障部近日对《工伤保险条例》的8处规定做出补充说明,旨在更全面地保护职工利益。
《工伤保险条例》是从今年1月1日起开始施行的。此次劳动保障部对其作出的补充说明除上述内容外,主要还包括以下方面:除正常上下班途中以外,职工加班加点的上下班途中出车祸也应认定为工伤;职工在工作时间和岗位上突发各类疾病死亡,或在48小时内抢救无效死亡的,视同工伤,其中“48小时”以医院的初次诊断时间作为起算时间;工伤职工旧伤复发时,是否需要治疗应由治疗工伤职工的协议医院提出意见,有争议的由劳动能力鉴定委员会确认;用人单位未按规定为职工提出工伤认定申请,出工伤或患职业病的职工及其直系亲属、工会提出工伤认定申请时,单位是否同意不是必经程序;职工因工死亡后,其供养亲属享受抚恤金待遇的资格,应按职工死亡时的条件核定。
北京晨报·雷加
处置突发事件中的财务保障既不同于战时,也不同于平时,它具有突发性强、经费开支范围广、保障对象复杂等特点。武警部队研究处置突发事件财务保障,对于履行武警部队职能,顺利完成处突任务,保卫人民群众的生命、财产安全具有重要意义。
一、突发事件概念及特点
(一)突发事件概念
突发事件主要是指由于不可抗力的自然现象或人为影响造成的,在不确定的时间、空间内发生的事件。它主要包括:1、自然灾害,如地震、洪水等;2、重大的事故,如爆炸、空难等;3、人为蓄意破坏社会稳定的骚乱与暴乱或恐怖行为。
(二)突发事件的主要特点
1、破坏性强。突发事件的突然出现,必定会给国家和群众造成很大的损失。如汶川地震、南方冰雪灾害以及“911”恐怖袭击等,这些事件虽然已经过去很多年,但是造成的损失是难以估计的。
2、不确定性大。突发事件发生的时间不确定、地点不确定、所涉及的范围也不能确定,这种不确定性给人们了解和控制突发事件带来了很大的困难,特别是一些重大的自然灾害和事故,如果没有提前充分准备,又不能及时控制这类事件,给国家和人民带来的损失是不堪设想的。
3、事态难以控制。突发事件的发生是人力无法控制的,人们只能是做一些力所能及的事情来防止事态进一步恶化,避免更大的损失。
二、武警部队处置突发事件财务保障的特点及存在问题
(一)武警部队处置突发事件财务保障的特点
1、保障时效性强。突发事件发生的“突然性”以及对社会造成的巨大冲击往往会在极短时间内迅速扩散,事件能否得到及时、有效的处置,直接关系到国家和社会的安全稳定。因此,武警部队闻令必须立即出动,准备时间非常有限,这要求财务保障工作必须做到“边行动、边准备”,确保部队在第一时间得到充足的经费供应。
2、准备仓促,筹资困难。部队从接到命令到组织开进,通常只有短短几个小时准备时间,因此,处突期间,财务保障工作往往处于“边筹备、边供应”的持续紧张状态中,时常遇到筹资难题。
3、保障面宽,统筹难度大。处突力量编成比较复杂,由于增援友邻单位、公安等协同作战单位的参与,导致经费保障协调难度增大。
(二)武警部队在处置突发事件财务保障工作中存在的主要问题
1、忧患意识不强,应急思想淡化。相关财务人员思想麻痹,忧患意识淡化,是目前普遍存在的问题。比如,有的认为如果有处突任务,也不一定轮到自己;有的认为应付突发事件与财务部门没多大关系;有的认为现在财务工作本来就很忙,没时间去关心和研究这些“莫须有”的事情。
2、资金储备不足,财务保障反应滞缓。目前,武警部队只有个别机动师、机动支队储有应急资金,其他部队储备很少。就有应急资金储备的部队而言,虽有专户储备资金,但因存储量小,很难满足处突需求。
3、规章制度不全,财务保障缺乏有序性。一是财务保障预案不完善,目前不少单位没有拟制应付突发事件的财务保障预案,即使有,内容也缺乏可操作性。二是缺少完整的经费标准,应付突发事件所涉及的经费开支范围广、经费分配难度大,但目前武警部队却还没有一套完整合理的经费标准,使部队在执行中难以把握。
三、优化武警部队处置突发事件财务保障工作的几点建议
(一)制定科学合理的保障预案
为了增强财务保障工作快速反应能力,必须从实际出发,结合突发事件的特点制定一套科学、合理的财务保障预案。
1、必须遵循统筹兼顾、保障重点的原则。制定保障预案必须通观全局、把握关键,充分认识突发事件的特点、对象、环境、规模和强度,协调好当前与以后、重点与一般的关系,集中主要财力确保重点方向、重点部队和重要时机的经费供应,同时要兼顾一般,保证整体的作战效能。
2、必须有多案准备。财务保障预案的制定,既要立足现有的条件和基础,又要着眼于突发事件发生发展的需要,遵循多情况、多方向准备的原则。既要有对所属单位的保障方案,又要有对支援部队保障的措施;既要有应付自然灾害的保障方案,又要有应付恐怖袭击的保障措施。
(二)合理预计经费需求,确保资金供应
处突中,由于处突任务、环境以及规模等的不确定性,经费需求伸缩性较大。因此,必须坚持宏观控制、定量供应的原则,合理预计经费需求量,保证经费供应的及时性。
1、要明确部队处置突发事件的经费标准。主要是补助经费和特殊开支。在目前没有统一标准的情况下,各总队、机动师财务部门在处置突发事件初期就应及时与总部有关部门联系,明确经费标准,并及时通知一线部队,为定量供应提供依据。
2、要掌握处突部队的人员实力以及处突时间,并了解各个部队承担的任务和动态,以便准确计算出各部队所需的日常开支和某些特殊性开支,以达到统筹兼顾、突出重点的保障要求。
(三)多渠道筹措经费,增强应急机动能力
突发事件突然性强,短期内对经费需求量大,如果只靠自身单一渠道筹措经费将很难满足经费需求,这就要求我们必须多渠道筹措经费,增强财务保障应急机动能力。
1、预拨部分机动经费。根据近年来部队执行抗洪抢险、抗震救灾、反恐治乱等突发事件任务的经验,在某些特定时期,如汛期、特定节假日等,应从机动经费中预留处置突发事件专项储备金,设立专项储备资金项目,为突发事件财务保障做好准备。
2、压缩各项经费开支。在接到处置突发事件的任务后,为保证部队紧急机动时所需资金,应当在最大限度推迟报销经费开支、借款的基础上,压缩基建开支项目,充实处置突发事件资金储备。
3、提取基层部分生活结余经费。参加处突的主体是基层连队,财务保障的重点也是基层连队。为此,财务部门可以预先从基层连队历年来的生活经费结余中提取部分资金。
4、依靠社会力量解决困难,尽可能地争取地方银行、地方政府和人民群众的支持。
(四)加强监督,确保经费使用效益。
1、制定并完善突发事件财务管理规定。管理规定应包括保障原则、经费开支范围、供应关系、审批权限及资金结算方式等内容。
2、及时清理结算,不留悬案。突发事件的财务清理,涉及面广,情况复杂,及时做好财务清理工作,有利于及时准确有效地实施经费供给,考核计划执行情况,分析经费保障程度和各项经费的使用效益。各项债权债务、往来款项都要及时清理与结算,特别是在特殊情况下向友邻单位、地方政府和个人的借款及采购物资器材、主副食欠款,要做到不漏项目,不留悬案。同时,要做到票据完整,账目记载清楚,资金安全。
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最高人民法院于2003年出台了《关于审理人身损害赔偿案件适用法律若干问题的解释》,确立了经营者的安全保障义务,明确了安全保障义务人的义务范围和责任界限。新颁布的《侵权责任法》中也明确规定了公共场所经营者的安全保障义务。这种义务可以表现为很多具体的形式,如警示义务、告知义务、帮助义务等。因此,义务人违反这种法定的义务就可能构成不作为的侵权行为。由此可见,现代法律对侵权受害人的保护已经非常肯定地从积极侵权扩展到了消极侵权的保护。
我国《侵权责任法》在侵权责任的承担中确立了补充责任制度。具体规定在第37条第2款以及第40条的相关规定。从相关条文可见,补充责任具有以下几个特点:第一,补充责任没有改变违反安全保障义务的过错责任性质;第二,补充责任在责任分担上具有顺序性;第三,补充责任不承担最终责任。不难看出补充责任确实算作我国立法上的一个创设,也体现了我国侵权责任形态的法律传统。我国当前主流侵权法学者延续了上一代民法学者对受害人求偿不能风险的强化保护倾向,对违反预防他人侵权义务的不作为侵权与直接侵害他人民事权益的侵权行为,做出了轻重不同的价值判断。①补充责任也就不同于传统理论上的按份责任或是连带责任,也正是因为如此,补充责任才得在某种程度上以消除了传统侵权法适用按份责任或连带责任的困境。
数人侵权的连带责任是指,数个责任主体对侵权造成的损失承担连带责任。每一个责任人都对损害负有全部的赔偿责任,其中一个责任主体承担了全部责任之后可以就不应由其承担的份额向其他责任人求偿。补充责任的支持者指出在第三人侵权,安全保障义务人未尽到安全保障义务的情形中,一个积极的侵权行为和一个消极的不作为不能构成一个关联的行为。②但是,这样的困境是有所夸大的。不论是积极的侵权行为还是消极的不作为,从主观心态上都可能存在故意或者过失两种情况。
同样,如果适用按份责任也会导致面对困境。因为很多情况下,安全保障义务人为履行其义务是损害发生的必要条件。很多特定情况下,如果没有安全保障义务人不作为,也就不会发生损害的后果。另一方面,实施侵权行为的第三人当然对损害结果的发生有直接的因果关系。因此,运用按份责任是很难从全部责任的范围中划分出一部分属于各方的责任的,在实践中尤其不好操作。
因为补充责任避免了上述困境的产生,所以补充责任得以取代其他责任形式最终以描述的方式规定在了《侵权责任法》中。但是,补充责任也因它与其他责任形式的巨大的差别受到了很多学者的批评。
存在不同声音的最总分歧是,违反安全保障义务的人究竟是不是终局的责任人。按照侵权法的过错归责原则,安全保障义务人违反了义务,具有过错,因此应当承担责任。而在补充责任中安全保障义务人实现了追偿权的情况,显然对过错责任原则有所违背。而这种违背的原因就在于,当侵权法发展逐渐引入不作为侵权时,却没有将其与作为侵权行为同等看待。注意义务可以分为作为的义务和不作为的义务,不应该作为而作为是一种过错,应该作为而不作为同样也是一种过错。又怎么能说安全保障义务人没有最终的责任?③
对安全保障义务质疑的第二种观点就是对补充责任顺序性的批评。在补充责任的制度下,只有当受害人先行向致害的第三人求偿,并且要求偿不能或者求偿不充分的情况下,补充责任人才承担责任。这就使部分学者认为,这种规定破坏了安全保障义务本来应该具有的警示意义。当安全保障义务人的责任退居其后,容易使人抱有让致害人承担全部责任的侥幸心理以及推卸责任的借口,从而对自身的过错缺少强有力的惩罚措施。这种有失偏颇的认识都是来自于对不作为侵权特殊性的排斥。不作为行为与损害结果之间的因果关系其实一直存在,安全保障义务人违反安全保障义务,导致危险的增加和扩散,最终导致了潜在的危险变为了现实的损害。
综上所述,无论是从过错责任的基本精神还是因果关系的角度,补充责任作为非最终责任存在都是不合理的。
然而,这些批评和质疑仅仅是说明了补充责任支持者所认为的补充责任的一大特点――非终局性是不成立的,并不能全面否定补充责任作为对不作为侵权的一种创设性的对应责任形式不是大有裨益的。这就需要对第三人侵权时,安全保障义务人的补充责任进行重构。
第一,保持补充责任顺序性的必要。补充责任的顺序性是因为在作为侵权和不作为侵权的责任结合下,作为侵权的直接责任具有主导性,而不作为侵权的责任具有从属性。如果没有第三人直接侵害民事权益的行为,也就不会有潜在的危险变为现实的损害。因此,将其置于次要的顺序也是合理的。
第二,对非最终责任的修正。如上面所论述的,补充责任不能否认安全保障义务人违反安全保障义务时,即使是对第三人造成的损害也是负有最终责任的。因此,笔者认为规定安全保障义务人赔偿之后享有全额的追偿权是不合理的。很多情况下,如果安全保障义务人尽到了安全保障义务,那么实际的损害就可能不会发生,当第三人充分赔偿了被害人的损失之后,安全保障义务人已无剩余赔偿责任,不应当有追偿权。
在这两种不同的设置中,笔者认为前者较为合理。因为考虑到安全保障义务人通常是商业经营者,在经济中处于优势的地位,也能比较便利地利用商业保险来分担自己的损失。因此,补充责任应当补充第三人不能赔偿的全部剩余责任,但是追偿权仅仅限于超出其过错范围的“补偿”部分。
第三,之所以在对安全保障义务人之补充责任的支持与质疑的分歧中,笔者选择修正地坚持补充责任,是因为补充责任是一种强调责任顺位的新型责任形式,又能通过求偿权的大小有无来体现“公平责任”的价值取向,无疑可以有更广阔的适用空间。
而安全保障义务追根溯源于德国法,德国法继受罗马法而来,作为义务主要来自于法定、约定或者先行行为。随着社会越来越复杂,越来越多的义务不能借助传统的理论来解释,交往安全义务就孕育而生,使得义务不限于前面三种来源,而是依据“开启或持续危险”这一实质标准来判断。④我国《侵权责任法》第32条,同样可以用交往安全理论解释,并按同样的路径看做是补充责任的扩展。按照上文对补充责任的分析,为保证被无民事行为人、限制民事行为能力人侵权的受害人的全部损失得到足额的赔偿,监护人可能会承担超出自己过错范围的赔偿责任,对于超出的部分,监护人仍然对被监护人保留追偿的权利。
对教育机构违反特殊安全保障义务、甚至是出租人、分包人、雇主等违反自己应尽的注意义务,第三人侵权造成损害,都可以适用补充责任。综上,若是能够在内在一致性的前提之下,对关联的、同质的规范进行整合,对不作为侵权预防义务的对应责任加以统一,补充责任不仅能够作为特别创设得意完善,也能为法律体系的发展做出一些贡献。(作者单位:四川大学)
注解:
① 王竹,《补充责任在上的确立与扩展适用――兼评第14条及相关条文》,《法学》2009年第9期。
【关键词】 人低分化鼻咽癌细胞;H2O2;肿瘤相关基因;细胞培养;肿瘤治疗
【Abstract】 Objective: To observe the effects of H2O2 on the proliferation of nasopharyngeal carcinoma cell line (CNE2Z) and study the possible mechanisms. Methods: The CNE2Z cells were treated with H2O2; the assays of MTT and plate colony formation were used to measure the ability of proliferation of CNE2Z cells; the western blot was used to detect the protein levels of Egr1, p53, p16 and cyclin D1. Results: In a dosage dependent manner, H2O2 inhibited the proliferation of CNE2Z cells, shown by both the MTT and plate colony formation assays with stronger displaying in the plate colony formation assay; without treatment of H2O2 CNE2Z cells express slight p53 and cyclin D1 proteins but no detectable Egr1 and p16 proteins; after treatment with H2O2, CNE2Z express significant higher proteins of Egr1, p53 and cyclin D1 with no detectable change p16 protein. Conclusion: H2O2 might inhibit the proliferation of CNE2Z through increasing the expressions of Egr1 and p53 proteins; since Egr1 expression was inducible, Egr1 might be a target in the tumor therapy.
【Key words】 nasopharyngeal carcinoma; H2O2; tumor therapy; tumor proliferation
鼻咽癌(NPC)是一种具有显著种族及地理分布特点的恶性肿瘤,以我国华南及东南亚地区高发。鼻咽癌的治疗目前仍以放射治疗为主,但5 a生存率低于50%,远处转移或复发是鼻咽癌患者死亡的主要原因。H2O2可以增强放射抵抗细胞的放射敏感性,放射后细胞ROS (Reactive oxygen species) 生成减少是肿瘤细胞的放射抵抗的重要原因。本实验观察H2O2对鼻咽癌细胞生长、增殖的影响及其相关癌基因的表达。
1 材料与方法
1.1 材料
细胞系:人鼻咽低分化鳞癌细胞系CNE2Z,广东医学院病理学教研室建株保存。
1.2 主要试剂
兔抗人EGR1多抗(Santa Cruz, USA Cat:SC110);小鼠抗人p53单抗(野生型,英国曼彻斯特Paterson癌症研究中心分子生物系提供);小鼠抗人p16单抗(DAKO,Cat:SC245);小鼠抗人Cyclin D1单抗(Santa Cruz,USA Cat:SC19992);HRP标记山羊抗兔IgG(H+L)(北京中山,Cat:ZB2305);Western Blotting Luminol Reagent (Santa Cruz, USA Cat:SC2408);X线片(Koda,USA);显影液、定影液(广州天朗涂料化工有限公司)。
1.3 细胞毒实验(MTT法)
取对数生长期细胞(细胞密度为1×105~2×105 /mL),接种于96孔培养板(200μL/孔)。待细胞长成单层后,换以含H2O2 的培养液使其终浓度分别为0、15、25、50 μmol/L,然后分别培养2、4、6 h,再加入MTT 15μL/孔(浓度为5 mg/mL),37 ℃培养箱中放置4 h后终止培养;吸弃各培养孔内上清液,于每孔加入150μL的二甲基亚砜,震荡摇匀,37 ℃放置2 h,在全自动酶标仪上以波长490nm及570 nm测各孔吸光度,结果以各组6孔OD均值±标准差(±s)表示。计算H2O2对细胞增殖的毒性以抑制率来反映,其抑制率(IR)的计算公式为:细胞抑制率IR(%)=(对照组OD值实验组OD值)/对照组OD值×100%。
1.4 平板克隆形成实验
取对数生长期细胞以每孔300个接种于24孔培养板,观察不同浓度(15、25、50μmol/L)的H2O2 使用液,培养2、4、6 h后,继续常规培养7~10 d。计算每孔的克隆数,50个细胞以上者计为一个克隆,并按以下公式计算克隆形成率。克隆形成率(%)=平均克隆数/接种细胞数×100%;抑制率(%)=(对照组克隆数实验组克隆数)/对照组克隆数×100%。
1.5 Western Blot印迹
取对数生长期细胞分别处理后0 min、15 min、30 min、60 min、2 h、4 h、6 h收集细胞,抽提细胞总蛋白。蛋白定量按BCA试剂盒说明书进行。细胞总蛋白抽提 取对数生长期细胞接种80 mL培养瓶,置于CO2培养箱中培养20 h后,将培养液分别换成空白对照液和50μmol/L的H2O2 使用液继续培养,分别于处理后0 min、15 min、30 min、60 min、2 h、4 h、6 h抽提细胞总蛋白;SDSPAGE 按照操作手册安装BioRad公司的微型垂直板电泳槽,制备0.75 mm厚的聚丙烯酰胺凝胶,注意防止渗漏。根据目的蛋白的分子量确定所需SDSPAGE分离胶的浓度;EGR1、p53和Cyclin D1配制10% SDSPAGE分离胶;p16配制12% SDSPAGE分离胶。转膜;蛋白印迹 EGR1 1∶300,p53 1∶500,Cyclin D1 1∶300,p16 1∶1000。检测EGR1、p53和Cyclin D1蛋白表达,采用图像分析软件Scion Image(Beta 4.0.2版,Scion Corporation,USA.),测量各蛋白的相对表达量。
1.6 统计学处理
实验数据采用统计学软件SPSS 11.0 进行统计分析,行方差分析、q检验和相关分析,以P
2.1 不同浓度H2O2对CNE2Z细胞增殖的影响
MTT及平板克隆形成实验结果表明,不同浓度H2O2可不同程度地抑制CNE2Z细胞增殖,同一时间点各实验组细胞抑制率相比差异有统计学意义(P
2.2 Western Blot 结果
CNE2Z细胞缺失EGR1、p16蛋白表达,可见p53、Cyclin D1蛋白表达;50μmol/L H2O2诱导培养后,可见EGR1迅速表达,15 min开始出现,2 h左右即达到最大值,随后表达趋于消失; p53蛋白诱导表达明显增加,与EGR1蛋白表达水平呈正相关(r = 0.883,P = 0.008),其中4 h的相对表达量较其他时间点均高,随后表达减低,差异有统计学意义(P
图1 H2O2诱导前后EGR1、p53、Cyclin D1在CNE2Z细胞中的表达
图2 H2O2诱导前后EGR1、p53、Cyclin D1在CNE2Z细胞中的表达
3 讨论
H2O2对肿瘤的发生、发展有双重影响[1]。一方面它具有抑制细胞DNA损伤后修复、形成DNA碱基加成物、影响细胞内信号转导途径、改变细胞粘附特性、促进表达VEGF等多项作用,因而能促进肿瘤的发生与发展;另一方面,H2O2具有诱导细胞凋亡及坏死、抑制细胞增殖等功能,因此又具有一定的抗肿瘤作用。放射线、紫外线及某些抗生素类的抗癌药物治疗肿瘤的机制之一即是通过氧化应激作用来实现的,研究认为肿瘤细胞的放射抵抗至少部分是由于放射后细胞ROS生成减少所致,而H2O2可以增强放射抵抗细胞的放射敏感性,因此探讨H2O2对肿瘤细胞生长、增殖的影响及其机制有一定意义。
本实验结果显示H2O2可诱导EGR1表达,2 h左右即达到最大值,随后表达趋于消失; p53蛋白表达明显增加,与EGR1蛋白表达呈正相关。Egr1是肿瘤细胞的一个抗增殖信号,可促进细胞凋亡[23]; Egr1基因启动子具有可诱导性,辐射可以诱导其蛋白表达,其表达在辐射所致的细胞生长抑制及凋亡中具有重要意义[45]。适当浓度H2O2在体外实验中能一定程度抑制肿瘤细胞生长、增殖,诱导凋亡,H2O2能抑制鼻咽癌细胞生长及凋亡可能与EGR1蛋白的诱导表达有关,其途径可能是通过依赖p53途径起作用。研究表明 NPC 中 p53 基因突变很少见,但是免疫组化证实 p53 过表达比较常见,其原因可能是负责 p53 降解的酶通路失活或是细胞、病毒基因产物干扰了某些功能的结果,而 p53 积聚对鼻咽癌细胞生长有一定优势作用。细胞周期素对维持细胞正常周期进程具有重要意义,其中 Cyclin D1 在 G1/S 期转换中发挥重要作用[6]。Cyclin D1 可与 CDK4/6 结合而使 pRb 磷酸化,高磷酸化的 pRb 随之释放转录因子E2F,使细胞由 G1 期进入 S 期,因此 Cyclin D1 可通过调节细胞周期使之始终处于旺盛分裂状态而促使细胞恶性变。已发现多种肿瘤中都有 Cyclin D1 的高表达,因此细胞增殖能力旺盛,能够不断分裂增殖而最终形成肿瘤。本实验显示H2O2能诱导Cyclin D1蛋白表达逐渐增强,60 min左右即达到最大值,最后表达趋于减弱,Cyclin D1蛋白表达趋于减弱与EGR1蛋白表达增强密切相关,H2O2能抑制细胞生长及凋亡可能与Cyclin D1表达减弱及EGR1蛋白表达增强有关。p16是目前肿瘤研究中的热点,已证实在多种肿瘤中发挥抑癌基因的作用,其编码产物通过与 Cyclin D1竞争结合 CDK4/6,阻止 pRb 磷酸化,使细胞分裂在G1 期受阻。因此 p16 的功能是通过 pRb 依赖性途径而实现的,并且在体内存在p16、CDK 及 pRb 的负反馈调节环路。当 p16 基因失活时其蛋白不能正常表达,从而增加 Cyclin D1 与 CDK4/6 的结合,进一步刺激细胞分裂、异常增殖而致肿瘤发生。
Chung等[7]研究发现在缺失野生型p53的人肺癌细胞系H1299中,H2O2可通过转录因子激活p21途径而使细胞周期阻滞于G2/M期,与我们的实验结果有所差别。由于CNE2Z细胞系中尚存在一个野生型p53等位基因,因此我们推测H2O2可以通过诱导EGR1表达并进一步激活野生型p53而致细胞周期阻滞于G1期,两者可能在H2O2所致的细胞生长抑制及凋亡中起重要作用。我们在实验中发现H2O2可以诱导CNE2Z细胞表达EGR1,EGR1表达有助于提高肿瘤细胞的放射敏感性,因此在肿瘤放射治疗中,联合应用H2O2对某些具有放射抵抗的肿瘤可能具有一定的意义。
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