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颈椎病的预防,应从病因及发病诱因两方面采取措施,以有效地降低发病率和防止已治愈患者的复发。颈椎是脊柱的一部分,要从脊柱的整体加以预防。
颈椎病的预防,应从儿童时期开始。加强体质锻炼,促使椎周软组织强状有力,有助于增强脊柱的稳定性。注意防止外伤和纠正工作与生活中的不良姿势。颈椎病的诱发因素除外伤外,常见的还有强迫工作、过度疲劳、落枕、受凉、姿势不良等。
2.1 严防急性头、颈、肩外伤:头颈部跌伤、碰击伤及挥鞭伤,均易发生颈椎及其周围软组织损伤,直接或间接引起颈椎病,故应积极预防。有些外伤不容易引起人们注意,例如坐车打瞌睡,遇到急刹车,头部突然后仰,孩子为了躲避大人拧耳朵而急性扭颈,或击打孩子后头部等,都可以导致颈肌损伤;婴幼儿颈软,不正确抱孩子,都可导致颈椎损伤;体育运动之前不热身,都有可能导致颈椎损伤,一旦发生应及时检查和彻底治疗。
2.2 心理上。对疾病要有正确的认识,树立战胜疾病的信心,由于颈椎病病程比较长,椎间盘的退变、骨刺的生长、韧带钙化等与年龄增长、机体老化有关。病情常有反复,发作时症状可能比较重,影响日常生活和休息。因此,一方面要消除恐惧悲观心理,另一方面要防止得过且过的心态,积极治疗。
2.3 姿势。工作学习的姿势不正确是颈椎病的主要诱因,良好的姿势能使劳累减轻。低头时间过长会使肌肉疲劳,颈椎间盘出现老化,继而出现慢性劳损。伏案工作的正确姿势是颈部保持正直,微微地前倾,不要扭转、倾斜;时间上,超过1小时,做些颈部运动或按摩;适当休息几分钟,一定要注意头不能靠在床头或沙发扶手上看电视。在行驶的车上不要打瞌睡,颈椎受伤时要用颈托保护。
2.4 饮食上。由于颈椎病是椎体增生、骨质退化疏松等引起的,所以颈椎病患者应以富含钙、维生素C、维生素E、维生素B族和蛋白质的食物为主。
2.5 颈部保暖。颈部受寒冷刺激可以导致肌肉血管痉挛。空调温度不能太低在夏季,防止颈肩部受凉特别是夜间睡眠时,最好穿高领衣服在秋冬季节。
2.6 睡床上。从颈椎病的预防和治疗角度来看,如果床铺过于柔软,可造成由于人体重量压迫而形成中央低、四边高的状态。时间一长,就会影响颈椎本身的生理曲线。用枕适当。人生的三分之一是在床上度过的,枕头的高低软硬对颈椎有直接影响,枕头应该能支撑颈椎的生理曲线,保持颈椎的平直。枕头要有弹性,枕芯以木棉、谷物皮壳为宜。侧卧睡觉时,高度为10厘米左右,仰卧睡觉时,应选择5厘米左右枕头(受压以后的高度),仰卧位时,枕头的下缘要垫在肩胛骨的上缘,颈部不能脱空。“枕颈”应该是枕头的真正名字。不合适的枕头,是造成落枕的原因,颈椎病的先兆往往是反复落枕,诊治要及时;另外要注意的是枕席,草编枕席最好,竹席太硬太凉。
2.7 身体上。颈椎病急性发作期或初次发作的病人,要适当注意休息,病情严重者更要卧床休息2-3周。卧床休息在颈部肌肉放松,减轻肌肉痉挛和头部重量对椎间盘的压力,组织受压水肿的消退方面具有重要的作用。但卧床时间不宜过长,以免发生肌肉萎缩,因此应适当工作.
3 颈椎病治疗
颈椎病的治疗方法有保守治疗和手术治疗之分。绝大多数病人经非手术治疗能够缓解症状甚至治愈不发。每一种治疗方法都有它所对应的适应症,需要专科医师指导,需要一定的疗程。切忌病急乱投医,多种方法杂乱并用,频繁更换治疗方法,会使病情加重。
4 保守治疗
4.1 牵引法:通过牵引力和反牵引力之间的相互平衡,使头颈部相对固定于生理曲线状态,从而使颈椎曲线不正的现象逐渐改变,但其疗效有限,仅适于轻症神经根型颈椎病患者;且在急性期禁止做牵引,防止局部炎症、水肿加重。
4.2 锻炼。颈椎的锻炼应该持之以恒。①头中立位,前屈至极限,回复到中立位;后伸至极限,回复到中立位;左旋至极限,回复到中立位;右旋至极限,回复到中立位;左侧屈至极限,回复到中立位;右侧屈至极限,回复到中立位。动作宜缓慢,稍稍用力。锻炼时,颈部感觉有响声并伴有疼痛,可以减少次数或停止锻炼;没有疼痛的可以继续锻炼。②头中立位,双手十指相叉抱在颈后,头做缓慢的前屈和后伸运动,与此同时,双手用力对抗头的运动,以锻炼颈椎后侧的肌肉力量。
参考文献
颈椎病是指颈椎间盘退行性改变及其继发性椎间关节退行性改变,所致脊髓、神经、血管损害所表现的相应症状和体征,严重者可发展到下肢瘫痪。发病年龄多在中年以上,发病部位依次为颈5~6、颈4~5、颈6~7。颈椎病的发病年龄在下降,有的二十几岁甚至十几岁即有了颈椎病的体征和比较典型的临床症状,严重地影响了人们的正常生活、工作、学习。可见,对颈椎病的预防、早期诊断及治疗非常重要。
1 病因及病理
颈椎病是以颈椎及椎间盘的退行性病理改变为主,使神经根、颈段脊髓、血管及其他颈周围软组织受压,而引起颈、肩、上肢疼痛、麻木,头晕、头痛等症状为主的一种常见病。多发于中老年或长期伏案工作的人。但近年来,由于社会的不断进步、工作效率的提高、劳动强度增加、坐姿不正确等,使颈部受累,发病率提高和年龄段的下降。一些特殊人群(长期从事打字、微机、财会、绘图、统计等工作)发病率最高。
颈椎病的主要病理变化是颈椎段椎骨本身或椎间盘的变性。诱因往往是颈部软组织的外伤、损伤、着凉等不良刺激造成。颈部软组织如肌肉、韧带的变性使骨膜受到刺激,使间盘血液循环不良,慢慢形成骨赘,间盘变性,继而突入椎间孔,椎管压迫神经根,、椎动脉或脊髓而发病。
2 主要症状
颈部肌肉紧张活动受限,上肢窜痛、麻木或有头晕、头痛的症状,轻者劳累或工作症状加重,重者休息时即出现上述症状,甚至不能入睡。
3 早期诊断及治疗
以出现上述症状,X线颈椎正、侧片可有早期骨质改变,同时排除其他病变(如肿瘤、结核、骨折)即可基本确诊。颈椎触诊一般按棘突、棘突旁、横突、肌肉等顺序进行。注意压痛的部位、性质,有无放射,肌肉和软组织有无硬结或条索状,与周围解剖位置的关系,必要时挤压或叩击头部。骨折或脱位时压痛较明显;压痛发生在棘突或棘突间,并有硬结,可能为项韧带钙化;颈肌痉挛呈条索状,可能为软组织劳损或急性扭伤;压痛在棘突旁并向上肢放射,或头部纵向挤压痛者,考虑为根型颈椎病。对于颈椎病的治疗,80%~85%的患者均可用非手术治疗法治愈。比较有效的方法都采用综合性治疗方法,需要手术治疗的仅为少数。治疗以推拿为最有效、最直接的治疗方法。
另外针对颈椎病的口服、外用药物,理疗仪的应用皆有一定的作用。手术的方法是在上述疗法对颈椎病治疗无效,严重影响人们的正常工作、生活的情况下采用的。但因是创伤性治疗,费用高,病人比较痛苦,恢复期长,偶有复发,故一般不到不得已不被采用。
4 预防
颈椎病是一种老年性退行性改变。本病的发生、发展与不良的生活习惯有一定的联系。老年人在日常生活中要加强自我保健,参加各项体育运动时注意安全,避免损伤;防止颈椎超限度活动,一旦发生损伤应尽早治疗。注意端正头、颈肩、背的姿势,不要偏头耸肩,谈话、看书时要正面注视,要保持脊柱的正直,尽早和彻底治疗颈、肩和背软组织的损伤,防止其发展为颈椎病。注意颈部保暖,如出汗,饭后、浴后、睡后注意防范,防止受凉。及时治疗落枕及颈部不适,保持正确的工作,应注意避免长时间地固定于一种姿势,如低头伏案工作和仰头看电视等,如果是因为职业需要长期低头工作的,应在工作一小时左右就适当地活动头颈部,使颈部肌肉、韧带得到适当休息。老年人睡觉应用硬板床、低枕头,一般枕头以10厘米的高度为适宜;以中间低、两端高的元宝形为佳,也可选平枕。应每天坚持做颈部轻柔活动2~3次,每次5~10分钟。如头颈前屈、后仰、左右旋转、头部顺向或逆向转动,长期坚持锻炼,有利于颈肩肌肉弛张的调节和改善血循环。中医认为胡桃、山萸肉、生地、黑芝麻等具有补肾髓之功能,合理地少量服用可起到强壮筋骨,并起到推迟关节退变的作用。
5 保健
让病人了解颈椎病的有关知识,提高防病意识,增强治疗信心,掌握康复的方法。观察病人治疗过程中心理情绪的变化,调节心理情绪,保持乐观精神,树立与疾病艰苦抗衡的思想,保持心理健康。正确有效牵引,解除机械性压迫。注意牵引时的姿势、位置及牵引的重量,并及时发现牵引过程中的不良反应,如是否有头晕、恶心、心悸等。由于病人颈部制动,就应减轻局部刺激。应正确应用理疗、按摩、药物等综合治疗,以解除病痛,正确指导病人的头颈功能锻炼,坚持颈部的活动锻炼,方法为前、后、左、右活动及左、右旋转活动,指导病人两手做捏橡皮球或毛巾的训练,以及手指的各种动作。非手术治疗过程中注意疼痛部位,肢体麻木无力的变化按时测量体温、脉搏、呼吸、血压。长期卧床的病人,应注意有关卧床并发症的预防与观察。经常用50%的红花酒精按摩病人的骨突部位,如骶骨、尾骨、足跟处、内外踝等。按摩上、下肢肌肉,鼓励病人主动加强各关节活动。
参 考 文 献
中图分类号:R246 文献标识码:B 文章编号:1005-0515(2011)3-366-02
颈椎病是临床上的常见多发病。它泛指颈段脊柱病变后,引起的一系列临床表现。根据临床症状与体征可分为颈型、神经根型、脊髓型、交感神经型和椎动脉型。在治疗方面西医采用非甾体类抗炎药、肌松弛剂及镇静剂等药物治疗,严重者采用手术疗法[1],另外还有理疗法、推拿疗法、针刺疗法、穴位埋线疗法等。穴位埋线治疗颈椎病具有疗效好、疗程短、疗效较巩固等特点,现将近10年的研究文献综述如下。
1 穴位埋线治疗颈椎病的现状
唐氏[2]运用穴位埋线法治疗颈椎病725例。头痛头晕、耳鸣、眼花、流泪者取风池、C2~4夹脊、肩中俞、大椎;心烦、胸闷、易怒、咽痛者取C5,6夹脊、至阳、肩外俞;手臂麻木、上肢抬举后展困难、下肢行走不便者取C5~7夹脊、肩井、肩中俞、肩外俞、天宗、秉风、肩贞、手三里、大椎。每次取2~6个穴位,间隔4~5周埋线1次。经1次治疗痊愈者85例,2~3次治疗痊愈者361例,3~5次治疗痊愈者126例;显效53例,有效68例;无效32例。治愈率78.8%,总有效率95.5%。
徐氏[3]取夹脊C2和夹脊C7埋线治疗颈椎病150例(颈型22例,神经根型76例,椎动脉型35例,脊髓型11例,交感型6例)。埋线1次为1个疗程,15天左右行第2个疗程。3个疗程后统计结果:愈显率80%,总有效率94%,明显高于对照组。且病程在2年以内疗效最为明显,对颈型和神经根型疗效最好,对椎动脉型次之,对交感型和脊髓型为差。该法对改善颈椎病的临床症状有明显的效果,明显优于对照组的疗法。
徐氏[4]取双侧C5和C7棘突旁开1.5寸处(作者经验穴)治疗颈性视力障碍48例。埋线1次为1个疗程,一般15天后行第2个疗程。经1~3次埋线治疗后,痊愈29例,显效10例,有效6例,无效3例,总有效率93.7%.
蔡氏等[5]取颈肩部压痛点或放射学提示的增生椎体两旁的夹脊穴埋线结合手法治疗颈椎病148例(颈型68例,神经根型80例)。每周埋线1次,3次为1个疗程。结果其总治愈率为64.1%。对治愈者经6~12个月随访无复发。
哈氏[6]取患椎夹脊穴为主埋线治疗颈椎病60例(颈型22例,椎动脉型15例,神经根型23例)。配穴:颈型加大椎、大杼;神经根型加大杼、肩井;椎动脉型加完骨。需做2次埋线,间隔3个月。3个疗程后统计结果:其治愈率为75%,明显高于针刺对照组33%的治愈率。
徐氏、汪氏[7]等取双侧C5和C7棘突旁开1.5寸处(作者经验穴)埋线治疗颈椎病120例(颈型18例,神经根型66例,椎动脉型25例,脊髓型8例,交感型3例)。1次为1个疗程,15天左右行第2个疗程。3个疗程后统计结果:总有效率94.2%,明显优于对照组85.8%;病程在2年以内疗效最为明显;本法对颈型和神经根型疗效最好,对椎动脉型次之,对交感型和脊髓型为差;本法对改善颈椎病的临床症状有明显的效果,明显优于对照组;且埋线疗法对颈椎病的远期疗效较巩固。
徐氏[8]取双侧夹脊C5和大椎穴埋线治疗颈性眩晕68例。埋线1次为1个疗程,15天左右行第2个疗程。3个疗程后,其愈显率为80.9%,总有效率为97.1%,明显高于对照组的68.8%、81.7%,且病程1年以内疗效最好,1~2年次之,2~5年较差。
徐氏、江氏[9]取双侧C5和C7棘突旁开1.5寸处(作者经验穴)埋线治疗颈性血压异常55例。埋线1次为1个疗程,一般15天后行第2个疗程。结果经1~5次埋线治疗后,临床痊愈32例,显效16例,有效5例,无效2例,总有效率96.4%。治疗前后血压有显著性变化。
王氏,李氏[10]取大椎穴(顽固者可加陶道穴)用电针、埋线和穴位注射结合治疗颈椎病235例。两次治疗间隔时间为1周。治疗结果:总有效率95%,治疗次数最少1次,最多2次,平均1.5次。
欧氏、李氏[11]取大椎、病变椎体夹脊穴为主穴,大杼、肩外俞、肩井、压痛点为配穴,挑刺埋线治疗颈椎病98例。挑刺埋线每周治疗1次,5次为1个疗程。2个疗程后统计结果:治疗组总有效率96.9%,明显优于对照组84.0%。挑刺埋线疗法对颈型和神经根型疗效最好,椎动脉型次之,交感型和脊髓型为差,且对颈椎病的远期疗效较巩固,具有取效迅速、有效率高、远期疗效巩固等特点。
李氏[12]取双侧C3、C5夹脊穴埋线治疗椎动脉型颈椎病76例,埋线1次为1个疗程,半个月左右行第2疗程。治疗3个疗程后统计结果:治疗组总有效率93.42%,明显高于对照组82.89%。
徐氏[13]取双侧C5和C7棘突旁开1.5寸处(作者经验穴)埋线治疗颈性视力障碍50例。埋线1次为1个疗程,15天左右行第2个疗程。3个疗程后统计结果:总有效率94.0%,明显高于推拿治疗的对照组86.67%。其病程在2年以内疗效最为明显,且埋线疗法对颈性视力障碍的远期疗效较巩固。
刘氏、李氏[14]取患侧颈椎夹脊3~7(脊突旁开1寸处)、肩井、手三里埋线治疗神经根型颈椎病170例。共治疗3次,每次间隔时间15天,埋线1周内要求不要洗澡。结果治疗组治愈率68.8%,明显高于对照组48.2%,但总有效率90%低于对照组100%。31岁以下的患者的治愈率明显高于31岁以上的患者的治愈率,1年以下病程组的治愈率明显高于1年以上病程组的治愈率。
吴氏[15]运用小针刀配合埋线治疗神经根型颈椎病128例,其采用小针刀松解剥离术和穴位埋线治疗2周后进行疗效观察。结果治愈64例,显效38例,好转22例,无效4例,总有效率90.63%。
2 讨论
埋线法治疗颈椎病研究的开展还相当局限。从已发表的论文看,绝大多数来自湖北鄂州市优抚医院。存在的问题:(1)治疗方法单一,取穴较局限。统计文献中,仅有4篇分别采用埋线结合手法、挑刺、小针刀的疗法,其余全部采用单一的埋线疗法。仅有3篇结合了远部配穴,其余皆为单取颈部夹脊穴。(2)疗效评定标准不一致,不便于对照。统计文献中所采用的疗效标准描述均不一致。(3)统计文献中,多数文献是对各种症型一起进行治疗,仅有4篇文献是针对某种症型进行治疗。但其治疗方案却是单一的,没有进行各种症型辨证治疗。(4)现有埋线治疗颈椎病的研究中多为临床研究而没有发现实验原理的研究。统计文献全部为临床研究。
埋线治疗颈椎病虽然其仍然存在着痊愈率不高,特别是对年龄大、病程长的患者。但其有自身的特点,疗效是值得肯定的。在今后将会得到较大的发展。 笔者认为在今后的研究中应注意以下几个方面:(1)对各种症型进行分别研究,采用不同的取穴、不同的针刺方法,以筛选出各型颈椎病的最佳治疗方案。(2)取穴应局部取穴配合远部取穴,以在治疗颈部局部病变的同时更好地减除远部局部的症状,更快的减轻患者的痛苦。(3)在治疗过程中应多种治疗手段结合使用,使其发挥各自的优势,以更好的提高临床疗效。如结合推拿可调整患者的颈椎后关节紊乱,解除局部肌肉痉挛。(4)结合现代科学技术进行进一步的机理研究,以为提高临床疗效提供理论基础,更好地指导临床治疗。如可结合神经分布对同型颈椎病进行不同针刺手法的研究。(5)另外,可结合西医的药物疗法,将羊肠线在药物中浸泡后再植入穴位,如非甾体类抗炎药、肌松弛剂及镇静剂等。这也是我们面临的新的课题。
参考文献
[1] Slipman,Curtis W. MD; Lipetz,Jason S. MD; DePalma,Michael J. MD; Jackson,Howard B. MD . Therapeutic Selective Nerve Root Block in the Nonsurgical Treatment of Traumatically Induced Cervical Spondylotic Radicular Pain .American Journal of Physical Medicine & Rehabilitation,2004,83(6): 446-454.
[2] 唐淑琴.穴位埋线治疗颈椎病725例.山东中医杂志,1995,14(8):358-358.
[3] 徐三文.穴位埋线治疗颈椎病150例临床研究.中医外治杂志,1996,5(3):8-9.
[4] 徐三文.穴位埋线治疗颈性视力障碍48例临床观察.中国针灸,1997,17(11):679-680.
[5] 蔡全辉,张志渝.手法结合植线治疗颈椎病148例.新中医,1998,30(1):27.
[6] 哈志国.穴位埋线为主治疗颈椎病60例.针灸临床杂志,1997,13(11):34-35.
[7] 徐三文,汪厚根.穴位埋线治疗颈椎病的临床研究.中国针灸,1998,18(5):267-269.
[8] 徐三文.穴位埋线治疗颈性眩晕68例.国医论坛,1997,12(4):42-43.
[9] 徐三文,江卫军.穴位埋线治疗颈性血压异常55例临床观察.中国中医骨伤科,1999,7(4):26-27.
[10] 王玉明,李勃.大椎穴新用附235例颈椎病(N根型)临床报告.甘肃中医,1999,12(5):44-46.
[11] 欧广升,李金香.挑刺埋线治疗颈椎病98例临床观察.湖南中医药导报,2000,6(4):24-25.
[12] 李滋平.穴位埋线治疗椎动脉型颈椎病76例.新中医,2000,32(10):24.
wang yj, shi q, jiang jc, bian q, liang qq, li cg, zhou q, cui xj, lu s, zhou cj. j chin integr med. 2009; 7(1): 5358.
received may 30, 2008; accepted july 24, 2008; published online january 15, 2009.
indexed/abstracted in and full text linkout at pubmed. journal title in pubmed: zhong xi yi jie he xue bao.
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doi: 10.3736/jcim20090108open access
mechanism of yiqi huayu bushen recipe in treating cervical syndrome in rats with qi deficiency, blood stasis and kidney deficiency
yongjun wang, qi shi, jianchun jiang, qin bian, qianqian liang, chenguang li, quan zhou, xuejun cui, sheng lu, chongjian zhou
institute of spine disease, longhua hospital, shanghai university of traditional chinese medicine, shanghai 200032, china
objective: to explore the mechanism of yiqi huayu bushen recipe (yhbr), a compound traditional chinese herbal medicine, in treating cervical syndrome (cs) with qi deficiency, blood stasis and kidney deficiency in rats.
methods: a total of 30 threemonthold female spraguedawley rats were randomly divided into normal control group, untreated group and yhbr group; there were ten rats in each group. the rat model of cervical syndrome with qi deficiency, blood stasis and kidney deficiency was established by combining disease and syndrome models. after onemonth yhbr treatment in yhbr group, all rats were sacrificed. serum, plasma and cervical intervertebral discs were detected and observed by radioimmunology, histopathology, immunohistochemistry, etc.
results: compared with those in the normal control group, rats in the untreated group showed obvious signs of deficiency in vital energy, such as tiredness, ptosis, few movement, bluishpurple tongue and tail and weight loss; the weight of uterus and appendages, and the ratio of cyclic adenosine monophosphate/cyclic guanosine monophosphate were decreased; hemorheological parameters and the expression of alphagranular membrane protein (cd62p) were increased; the content of serum estradiol was decreased. yhbr could improve the above indexes except for the weight of uterus and appendages. he staining showed annulus fibrosus with cracks, diminish of pulposus nucleus, and decrease in the height of intervertebral disc and the thickness of endplate in the untreated group; and yhbr could improve the changes of cervical intervertebral discs, but no obvious changes in endplate. type ⅱ collagen protein (col2a1)was distributed in every part of the annulus fibrosus in normal control group, but was decreased in untreated group; yhbr could increase col2a1 expression in annulus fibrosus as compared with the untreated group. the expressions of col2a1 and tissue inhibitor of metalloproteinase1 (timp1) mrnas were decreased in untreated group as compared with the normal control group (p<0.01); the expressions of col2a1 and timp1 mrnas were higher and matrix metalloproteinase13 mrna was lower in the yhbr group than those in the untreated group (p<0.05, p<0.01).
conclusion: yhbr may improve the condition of cervical syndrome with qi deficiency, blood stasis and kidney deficiency by regulating immune system, coagulation system and endocrine system, and delay the degeneration of cervical intervertebral disc by regulating extracellular matrix and metalloproteases in intervertebral disc.
keywords: yiqi huayu bushen recipe; qi deficiency; blood stasis; kidney deficiency; cervical syndrome; rats
益气化瘀补肾方是施杞教授的经验方。本研究利用气虚血瘀肾虚型颈椎病动物模型,探讨益气化瘀补肾方对气虚血瘀肾虚型颈椎病的作用机制。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物 3月龄spf级sd雌性大鼠30只,体质量(240±20)g,由斯莱克实验动物有限责任公司提供,合格证号为scxk(沪)20030003。
1.1.2 主要仪器 全自动石蜡包埋机、组织脱水机和轮转式切片机(德国leica公司,型号分别为eg1160型、tp1020型和rm2135型),光学显微镜和图像分析系统(日本olympus公司,bh20型),紫外/可见光分光光度计(美国beckman公司,du 800/vis型),四通道荧光实时定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, pcr)仪(澳大利亚cobett公司,rotor gene 3000型),基因扩增仪(德国eppendorf公司,mastercycler personal型),γ放免计数器(中国科学院上海原子核研究所日环仪器厂,sn682型),流式细胞仪(美国becton dickinson公司,facscalibur型),全自动自清洗血流变仪(北京普利生仪器有限公司,lbyn6c型)。
1.1.3 主要药物和试剂 氢化可的松琥珀酸钠(天津市生物化学制药厂,国药准字h12020493),盐酸肾上腺素(上海禾丰制药有限公司,国药准字h31021062),盐酸氯胺酮(上海第一生化药业公司,国药准字h31021897),益气化瘀补肾方由黄芪15 g、川芎9 g以及补骨脂15 g等组成(上海中医药大学龙华医院制剂中心提供)[1]。中药水煎剂灌胃给药,含生药量0.687 g/ml,1次/d,3 ml/次。雌二醇(estradiol, e2)放射免疫分析药盒(北京北方生物技术研究所),125i环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate, camp)、125i环磷酸鸟苷(cyclic guanosine monophosphate, cgmp)放射免疫分析试剂盒(上海中医药大学核医学实验室),ⅱ型胶原兔抗鼠抗体(美国cell signaling technology公司),ⅱ型胶原蛋白表达免疫组化试剂盒(晶美生物工程有限公司),聚集蛋白聚糖(aggrecan1, agc1)、ⅱ型前胶原基因(type ⅱ procollagen gene, col2a1)、基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase13, mmp13)和基质金属蛋白酶抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinase1, timp1)引物(大连浩嘉生物技术有限公司),藻红蛋白(phycoerythrin, pe)标记的鼠抗人血小板表面α颗粒膜糖蛋白(alphagranular membrane protein, cd62p)抗体(英国serotec公司),trizol试剂(美国mrc公司),逆转录酶(北京天根生化科技有限公司)。
1.2 分组与造模方法
1.2.1 分组方法 将30只大鼠按随机区组设计,分为正常组、气虚血瘀肾虚型颈椎病模型组(简称模型组)和益气化瘀补肾方组,每组10只。
1.2.2 动物模型建立方法 动物模型的建立参照病、证模型复合而成的气虚血瘀肾虚型颈椎病模型[2],颈椎病造模3个月后,正常组和模型组正常饲养,益气化瘀补肾方组予益气化瘀补肾方治疗1个月,然后统一取材检测。
1.3 指标测定
1.3.1 动物行为和体征的观察 每天观察实验动物的精神、活动、皮毛、尾色、大便,有无缩肩拱背以及觅食等情况,3 d记录1次。
1.3.2 子宫及附件形态和质量测量 动物用戊巴比妥麻醉后,取出子宫及附件,为了与模型组和益气化瘀补肾方组相统一,正常组取出子宫及附件后去除双侧卵巢。先用肉眼观察子宫及附件的形态,再用电子天平称量子宫及附件的质量,每组随机取8个样本,进行统计分析。
1.3.3 血浆camp和cgmp含量检测 动物用戊巴比妥麻醉后,腹主动脉采血1 ml,乙二胺四乙酸抗凝,离心,取血浆,按照试剂盒说明书操作要求,用放射免疫法测定血浆camp和cgmp含量,并计算其比值。实验由上海中医药大学核医学实验室完成。由于实验过程中的意外或失误(其他血液样本同此),使各组样本量分别为7、7、7。
1.3.4 血液流变学指标检测 上述方法采血5 ml,肝素抗凝,摇匀,全自动自清洗血流变仪检测血液流变学变化。模型组有2个样本血液发生了凝固,所以样本量分别为10、8、10。
1.3.5 血cd62p检测 上述方法采血1 ml,肝素抗凝,用流式细胞仪检测cd62p的表达。取0.1 ml抗凝血,加入pe标记鼠抗人cd62p抗体20 μl,混合,4 ℃放置20 min;加2 ml红细胞溶解液放置10 min破红细胞;离心2 000 r/min,5 min,弃上清液;用磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline, pbs)洗涤细胞2~3次,再悬浮于0.3 ml pbs中,用流式细胞仪检测cd62p的表达。实验由中国科学院上海生命科学研究院细胞所完成。每组8个样本。
1.3.6 血清雌二醇含量测定 上述方法采血2 ml,离心,取血清,按照试剂盒说明书操作要求,用放射免疫法测定血清e2的含量。各组样本量分别为8、7、8。
1.3.7 椎间盘组织病理学观察 取大鼠颈椎间盘,4%多聚甲醛固定24 h,清水冲洗后,20%乙二胺四乙酸脱钙4周,脱水,透明,包埋,连续6 μm横断面切片,he染色。在光学显微镜下观察每个正中矢状面椎间盘结构。
1.3.8 颈椎间盘ⅱ型胶原蛋白表达的检测 采用免疫组化方法,具体操作步骤按照试剂盒说明书进行。棕黄色为阳性染色,每个标本在200倍光学显微镜下观察。
1.3.9 颈椎间盘agc1、col2a1、mmp13以及timp1基因表达的检测 用trizol法抽提mrna,逆转录后,采用实时荧光定量pcr方法检测基因表达。引物及反应条件参照文献[3]。用6个样本进行统计,结果用待测基因与βactin灰度值的比值表示。
1.4 统计学方法 采用spss 13.0软件进行统计分析,实验数据用x±s表示,组间比较采用单因素方差分析。
2 结 果
2.1 动物行为和体征 正常组大鼠喜动、活动灵活、皮毛光泽、无眼眯(眼睑下垂)和缩肩拱背现象。其余两组大鼠造肾虚模型后,形体逐渐肥胖,少动;在造气虚模型后7 d左右,开始出现倦怠少动、喜卧、皮毛蓬乱无光泽、眼眯和缩肩拱背现象,随着时间的延长症状逐渐加重;造血瘀模型后6~7 d大鼠出现舌质瘀紫,尾色瘀青。益气化瘀补肾方组动物上述行为和体征状态恢复较快。
2.2 子宫及附件形态和质量 模型组和益气化瘀补肾方组与正常组比较,子宫缩小,输卵管变细,质量明显减轻,益气化瘀补肾方组与模型组比较无明显差异。
2.3 血浆camp、cgmp含量和camp/cgmp比值 模型组与正常组比较,血浆camp、cgmp含量及camp/cgmp比值差异无统计学意义;益气化瘀补肾方组与正常组比较,血浆cgmp含量降低(p<0.05),与正常组和模型组比较,camp/cgmp比值增高(p<0.05)。见表1。
2.4 血液流变学变化 与正常组相比,模型组和益气化瘀补肾方组全血低切黏度、全血高切黏度和低切还原黏度均明显增高(p<0.01);益气化瘀补肾方组与模型组比较全血高切黏度显著降低(p<0.01);各组间聚集指数差异无统计学意义。见表2。表1 血浆camp、cgmp含量和camp/cgmp比值表2 血液流变学指标变化
2.5 血cd62p表达 与正常组相比,模型组和益气化瘀补肾方组cd62p表达明显增高(p<0.01)。益气化瘀补肾方组与模型组相比,cd62p表达明显降低(p<0.05)。见表3。
2.6 血清e2含量 与正常组相比,模型组和益气化瘀补肾方组血清e2含量明显降低(p<0.01)。益气化瘀补肾方组血清e2含量比模型组增高(p<0.05)。见表4。
2.7 颈椎间盘he染色 正常组颈椎间盘纤维环排列稍紊乱,髓核稍有皱缩,软骨终板潮标清晰可见,关节软骨层较薄;模型组与正常组相比,颈椎间盘高度降低,纤维环出现裂隙,纤维排列紊乱,髓核缩小,软骨终板变薄;益气化瘀补肾方组颈椎间盘高度维持正常,纤维环排列稍紊乱,髓核结构良好,软骨终板变化不明显。见图1。
2.8 颈椎间盘ⅱ型胶原免疫组化染色 正常组ⅱ型胶原在髓核与纤维环以及软骨终板均有分布;与正常组相比,模型组ⅱ型胶原表达减少,主要表现在纤维环;与模型组相比,益气化瘀补肾方组ⅱ型胶原在纤维环的表达有所增加。见图2。 表3 血cd62p的表达表4 血清e2含量
2.9 颈椎间盘agc1、col2a1、mmp13和timp1 mrna表达 与正常组相比,模型组col2a1和timp1 mrna表达降低(p<0.01);益气化瘀补肾方组与模型组相比,col2a1和timp1 mrna表达增高,mmp13表达降低,差异有统计学意义(p<0.05, p<0.01)。见表5。表5 agc1、col2a1、mmp13和timp1的基因表达
3 讨 论
颈椎病属中医学“筋伤”范畴,无论外邪侵袭还是劳损等病因所致,皆离不开气血的变化。颈椎病的发生发展除离不开气和血外,其与肾的关系亦较为密切。《素问·六节脏象论》曰:“肾者主蛰,封藏之本,精之处也。”所谓精,据《灵枢·本神》所曰“生之来谓之精”,即指先天之精气,也就是肾气,它对人体之生长、发育及形体之盛衰始终起着主导作用。颈椎病发生之相关因素中,椎体骨质增生、骨质疏松都与肾气是否充盈、骨与髓能否得到滋养不无关系。《张氏医通》云:“有肾气不循故道,气逆挟脊而上,至肩背痛。”这里也提出了肾与颈椎病的相关性。大鼠的行为状态,血浆camp和cgmp含量与免疫和代谢功能密切相关,血液流变学和cd62p是血瘀证的重要指标,血清雌二醇含量的减少表示肾功能低下。本实验中,这些实验室指标的测定结果说明模型组大鼠出现了气虚、血瘀、肾虚证的相关病理改变。颈椎间盘形态学、免疫组织化学及分子生物学的变化,证实了模型组大鼠有明显的椎间盘退变。该模型可以用于气虚血瘀肾虚型颈椎病的相关研究。
益气化瘀补肾方由黄芪、川芎和补骨脂等中药组成。黄芪不仅有增强免疫、扩张血管、改善微循环、强心和抗衰老等作用,也具有保护肾脏的作用[4]。川芎为“血中之气药”,其有效成分川芎嗪和阿魏酸等具有清除氧自由基、钙拮抗、扩张血管、抗血小板聚集和抗血栓形成等作用[5]。补骨脂有较强的雌激素样作用[6],还能通过调节神经和血液系统增强免疫和内分泌功能。可见,益气化瘀补肾方的作用不是单一方面的,而是通过多系统和多靶点发挥治疗作用。实验结果表明,益气化瘀补肾方可以通过免疫系统、凝血系统和内分泌系统改善气虚血瘀肾虚型颈椎病证候的相关指标,增加细胞外基质的基因和蛋白表达,抑制降解酶活性,从而达到延缓椎间盘退变的作用。
【参考文献】
1 jiang jc, li cg, zhou q, bian q, liang qq, cui xj, lu s, zhou cj, shi q, wang yj. mechanism of yiqi huayu bushen recipe in treating cervical syndrome with kidney deficiency in rats. j chin integr med. 2008; 6(12): 12801285. chinese with abstract in english.
江建春, 李晨光, 周泉, 卞琴, 梁倩倩, 崔学军, 卢盛, 周重建, 施杞, 王拥军. 益气化瘀补肾方对大鼠肾虚型颈椎病的作用机制. 中西医结合学报. 2008; 6(12): 12801285.