商业模式的保护范文

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知识经济与互联网时代到来至今，形成了多种崭新的业态，会展商业模式创新也成为会展业不断发展必不可少的原发动力。要使这种创新源源流长、要让创造者积极所为，必须对该类创新实行制度性保护，对侵权人形成威慑性约束，对侵占他人权利行为实施惩罚性制裁。但目前，我国对会展商业模式保护的关注和研究尚未有效展开。

一、会展业知识产权保护历程

作为现代服务业范畴的会展行业,其知识产权保护最早可以追溯到1873年的“维也纳国际发明展”。当时,展会举办国奥地利制定了一项特殊法律,向展会展出的各国发明、商标和外观设计提供特殊的临时保护。会展行业知识产权保护由此起步。

历史的脚步走到了21世纪门槛边,全球会展行业早已织就了较为完整的知识产权保护网,商标、技术发明、外观设计、新型应用等一应俱全。但也就在此时,随着计算机和网络技术的广泛应用,实践中出现了除已经被完善保护的传统知识产权形态外的样式繁多的会展商业模式。就是这类集人类智慧、借助现代技术手段实现的创新活动,却因其迟到,被拒在了已有的知识产权保护网之外。

为了保证并促进对各国经济繁荣起到积极推动作用的会展业的发展,面对出现的问题,各国相关学界、政府部门和企业,逐步投入到了会展行业商业模式保护的研究和实践之中,领头的自然还是发达工业国。

二、商业模式及会展商业模式保护现状

1.发达国家的研究与实践

(1)美国专利商标局(USPTO)于2000年3月公布了一项应对商业模式专利的行动计划。该计划的内容主要包括:修订商业模式发明专利的审查标准，扩大对美国“专利分类705”申请案件的检索范围，加强专利审查员的培训，以及保证对商业模式专利申请进行适格性、新颖性和非显而易见性的实质审查。USPTO还在2000年7月公布的商业模式专利白皮书中对商业模式专利的演变、“专利分类705”，以及专利审查员的培训方式做出了详细的说明，旨在进一步规范该类专利审查的标准。此外，USPTO还创建了“技术中心2100”，专门审理“专利分类705”类目中的申请。统计数字表明，第705类专利在1999年之后急剧上升，从1995年申请数的170件猛增到2000年的7800件，2001年达到1万件。经过几年的实践，在“阳光下一切人类的发明创造均可获得专利”的呼声中，商业模式在美国获得专利保护已不是问题，美国专利商标局和法学家们现在研究并更为关注的是，如何使该类专利审查制度稳定并规范。

(2)欧盟专利局曾一度将商业模式排除在专利保护之外。根据《欧洲专利公约》第52条规定，科学原理、数学方法、实施心理活动游戏或商业模式的技术、规则、方案,以及计算机程序、信息的表达是不可授予专利的。但随着美国率先认可了商业模式可以成为专利法保护的客体后，为了在国际知识产权的竞争中取得优势地位，欧洲专利局的态度也开始倾向于承认商业模式的可专利性。2001年11月欧洲专利局了新的专利审查指南，确认了其在计算机软件和商业模式上的扩大保护政策。根据该审查指南，商业模式的可专利性已不容置疑。欧洲专利局在处理一项商业模式专利的申请中，更加注重对其创造性和技术特征的判断，而非仅仅审查其是否属于商业模式本身。在经过了长期的、多方的辩论之后，欧洲的态度已由对商业模式专利的强烈反对转变为不再抵制，即商业模式可以通过“技术包装”而获得专利法的保护。

(3)日本在对待商业模式专利的问题上采取了实用主义的策略和主张。2000年日本特许厅修订了《专利审查指南》，增加了与商业模式有关的发明创造的实施例，对利用网络或计算机的商业模式不再被视为抽象的概念，可以在日本获得专利法的保护。此后，日本又于2002年修改了本国的《发明专利法》；2003年，日本知识产权战略本部又公布了“知识产权战略推进计划”，充分表明了其积极提升本国知识产权竞争力的态度和决心。

2.国内研究与实践

(1)会展实践方面。针对国内会展商业模式的表现形式,已有不少公开报道。如上海世博会标志特许经营的运营模式;第二届中国(深圳)国际科学生活博览会结合全国性的活动和互联网及媒体的资源，确立了三大平台互动的全新展会运营模式;慧聪网水工业产品采购交易会和慧聪网泵阀产品采购交易会将传统贸易展览会和电子商务有机结合,形成“采购交易会＋电子商务平台”――线上线下互动模式等等。此外,国内还有对诸如基于会展会后服务的商业模式、商业会展市场推广的整合模式、市场化运作展会模式等都进行过报道。

(2)司法实践方面。2000年3月，上海卓尚信息有限公司告e龙网信息技术北京有限公司“网上商业模式侵权案”，出现了号称“中国网上商业模式保护第一案”；2007年5月，北京首都在线网络技术有限公司提出“网络桌面媒体”商业模式的专利申请，出现了我国“商业模式保护”专利申请第一案。

(3)法规方面。2004年10月1日国家知识产权局于新颁布了《商业模式相关发明专利申请的审查规则(试行)》;2006年5月30日,国家版权局、信产部颁发的《互联网著作权行政保护办法》开始实行等。

另据国家知识产权局新闻发言人2007年介绍：从2006年开始，中国《专利法》进行第三次修改，送审稿当年年底已正式提交国务院审议。又据国家保护知识产权工作组办公室主任、商务部副部长在2007年介绍：“2007年政府部门在加强对知识产权的司法保护方面一个显著的特点就是，要进一步根据《专利法》修改情况研究制定涉及侵犯专利权认定标准的司法解释；通过对知识产权行政案件司法审查的范围、标准、程序、裁判方式等问题的调研，推动出台司法解释。”

3.结论

(1)对“商业模式”作为知识产权的一种类型进行保护已形成共识。从上述内容可以看到,以美、欧、日为代表的发达工业国对商业模式保护在本世纪初就从研究、立法、实施等各层面全面展开,我国也已在2004年颁布了相应的审查规则。

(2)保护方式多采用专利保护形式。知识产权保护方式通常为著作权保护、商标保护、专利法保护和反不正当竞争等。归纳国内外已有的实践和研究,对商业模式的保护主要采用专利保护法。

(3)会展行业商业模式保护尚未涉及。一方面,会展行业知识产权保护目前仍局限于商标、技术发明、外观设计、新型应用等传统领域,而对其商业模式保护国外也刚刚起步,国内未曾涉足。另一方面,现有商业模式保护的成功案例,无论国内还是国外,都集中在电子商务、网络游戏、金融和商业行业,在会展行业基本没有实践和研究。

三、会展商业模式保护的重要性与紧迫性

1.会展业的健康发展对上海的经济发展具有重要意义

上海市委书记在近期的市委常委会上指出：“上海转变经济发展方式迫在眉睫，现代服务业的发展决定上海未来。”上海近几年致力于发展的和发展最快的是现代服务业，2006年GDP比重已经超过全市的50%，而会展业则是其中重要的一块，其增长速度在最近的10年每年超过20%，而且还在紧锣密鼓筹办世博会。

2.会展业的健康发展需要更加完善的知识产权保护

上海把现代服务业中的会展业作为重点发展点，而且作为2010年世博会的举办地，上海自觉不自觉、愿意不愿意都已成为世界会展领域的瞩目地，也必将成为会展行业知识产权保护的中心舞台。面对行业内出现的知识产权保护的新内容、新问题，如何提升国内会展行业知识产权保护水平？是否需要对会展商业模式实行保护？怎样有效实现对会展商业模式的保护？如何与国际接轨、是模仿还是创新？世博会期间站在世界会展舞台中心的上海，在知识产权保护方面应该以什么样的形象出现？怎样体现希望的形象？……这些都是值得研究，而且是即待研究。

3.会展商业模式保护的完善，有利于整体创新环境优化

总书记2008年6月23日在“两院院士大会”上指出：“转变发展方式、实现经济社会又好又快发展，迫切需要我们加紧建设创新型国家”；“建设创新型国家，这是国家发展战略的核心”；“自主创新能力是国家竞争力的核心”。

会展商业模式创新和保护是知识产权保护的新领域，会展业又是现代服务业的重要组成部分，是上海经济转型发展的方向之一。开展会展商业模式保护研究，不但有利于知识产权保护水平的提高，也有利于创新城市乃至创新型国家的建设。

参考文献：

[1]龚维刚:上海会展业发展报告2007.上海人民出版社,2007.10

[2]过聚荣:2006年～6007中国会展经济发展报告.社会科学文献出版社，2007.4

[3]刘大可:中会展业:理论、现状与政策.中国商务出版社，2004.8

[4]贾丹明:“欧洲商业方法专利分析”[J].中国发明与专利,2007(5)

[5]余 翔 邱洪华:“美国银行业商业方法专利发展态势及其启示”[J].电子知识产权,2007（11）

[6]高山行 胡海平:“试论商业方法的专利保护”[J].情报杂志,2004（08）

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1.导论

城市是人类社会文明发展进步的产物，每个城市都有其独特的历史文化传统和发展轨迹，不同的地域文化在时间和空间上的积淀，形成了独特的城市文化和各具特色的建筑风格。然而，随着我国经济的快速发展和城市化进程的不断加快，城市的面貌发生着翻天覆地的变化，不知从何时起，传统民居、历史街区，甚至连文物古迹，似乎都被视为我们经济发展和开发建设的绊脚石。遗憾的是，在新区开发和旧城更新的同时，数百年来形成的富有人情味和鲜明特色的古老街区，经过一次次“脱胎换骨”式的改造，消失殆尽，迅猛而快速推进的城市化进程使得许多城市变成了“千城一面”的无个性的都市空间，我们已经很难透过不同城市独特的建筑风格感受到一个城市发展的历史脉络。

扬州市，作为一个有着悠久历史的文化名城，是我国传统风貌保存比较完好的古城之一。在城市化的进程中，扬州市努力推进着古城的保护与利用、改造与复兴，在改造古城传统格局和风貌、传承和展示历史文化、改善老城区居住环境、提升城市文化品位等方面取得了明显的成效。笔者有幸参与了扬州市紫藤园商业街规划设计工作，也希望在探索如何找出一条科学的、可持续发展的保护古城面貌的道路上，做出一些努力和尝试。

2.项目概况

紫藤园项目位于扬州市文昌商圈核心区，时代广场南侧，西为淮海路，东为通泗街（南小街），北为通泗北街，南为通泗西街。该项目是由扬州一家颇具实力的房地产公司开发，并努力将其打造成为集购物、休闲、娱乐、特色美食为一体的高档精品商业区。建成后的紫藤园将成为扬州文昌商圈核心区又一现代化商业综合体。

本地块规划用地总面积19815.9平方米，后经甲方要求，拟将地块西南角的两栋5层楼拆除纳入规划建设用地内，这样本次实际可规划建设用地面积为21043.3平方米。根据规划设计要点，建筑密度小于35％，绿地率大于20％，容积率小于1.3。项目用地内有一株一级保护古树——700年紫藤需原地保护，使其成为整个商业建筑群的中心与亮点。

3.规划设计理念

（1）古树保护：对用地内的一级保护古树——700年古紫藤原地保护，使其与新规划的商业建筑群和谐共生，让古老的紫藤焕发出时代的生机与活力，现代的建筑彰显出扬州的文化与传统。

（2）空间特色：以视线、景观为空间形态设计的核心，增强空间的纵深感、多样性以及步移景异的空间变化。。以古紫藤为景观中心，最大限度提升商业建筑群的空间感受。商业建筑采用院落围合式的建筑布局，保留古紫藤及其旁边较为集中的树木作为整个建筑群的景观中心，并设置下沉式的院落庭园，丰富了建筑群的空间层次，为地下一层赢得了良好的通风采光与环境景观，充分发掘了地下一层的商业价值。

（3）以人为本：景观、立面注重意境和细节设计，充分反映高档精品商业区的需要，创造简约、清新、雅致的氛围和风格，提升整个商业区的文化品味。以中心的步行街为主线，将错落有致的围合院落串联在一起，创造出良好的商业氛围，同时商业街以步行街为人流中心，并与地块北面的时代广场相辉映，形成良好的视觉感受，结合周边的公共绿化空间，提供与商业购物与休闲相吻合的绿化景观空间形态，形成舒适的商业空间类型与购物环境。

4.总平面设计

4.1总体功能布局

由于用地处于文昌商圈的核心区,周边有文昌阁、扬州金鹰以及时代广场等较有影响力的建筑，而且地块内又有一级保护古树作为景观中心，因此规划建筑的定位就是努力打造出一个既与扬州传统建筑形式相协调，又有现代时尚气息的高品质的商业综合体。建筑群的主入口放在时代广场南侧的通泗北街，次入口放在用地南端的通泗西街上，中间为步行街，内部以院落的形式组织，并结合院落布置景观绿化和适当的地面停车。

4.2交通流线组织

根据基地现状和规划要求，建设用地北面的通泗北街，南面的通泗西街各设一个机动车出入口，沿基地内建筑群周边设环形机动车道，中间为商业步行街，平时禁止机动车通行，但紧急情况下也可作为应急消防通道。这样的交通流线组织尽可能地避免了人流与车流的相互交织，为前来购物、游览的顾客提供了一个环境优雅，安全便捷的商业环境。机动车及非机动车主要停靠在地下车库，地面则利用室外边角地带设置少量临时停车位，能够充分满足商业购物停车配套的需求。

4.3景观设计

结合城市绿化景观，保留古树及其周边树木，作为建筑群的中心景观，并设置下沉式院落，形成步移景异，错落有致的多层次景观绿化效果，同时处理好沿街的地面铺装，配置好各种景观苗木绿化品种，并设置适量的休闲座椅供公众休憩。商业建筑的灯光设计则更多的考虑了城市的夜景效果，突显整个建筑群的商业氛围。建筑主体采用泛光设计，只在顶部集中处理光源，以形成城市的亮点。。整体以浅色泛光为主，局部点缀暖色点光源，以加强轻松的气氛。

5.关于建筑单体设计的思考

5.1关于城市空间和建筑形象的考虑——建筑体量的确定

用地位于文昌商圈的时代广场南侧，考虑到其特殊的地理位置，以及扬州老城区的整体建筑风貌，规划设计要点要求建筑的檐口高度以12米为主，局部最高不超过16米。形象和体量将对城市空间产生重要的影响，在设计之初我们首先要研究和确定建筑的大概造型和体量。基地的主要沿街面位于时代广场南面的通泗北街，地形较为方整，因此建筑需要考虑两个方面：

(1)如何处理好规划建筑布局与时代广场的协调关系，延续其原有的商业氛围和价值。

(2)规划建筑的布局如何巧妙地结合保护古树古紫藤，既起到原地保护的作用，又充分发挥古树的景观价值，从而提升建筑群的商业价值，和文化品味。。

因此建筑布局时利用时代广场的中心为中轴线设置开敞的商业步行街，将大量人流引入紫藤园商圈，提高了其商业价值。同时考虑到保留古树的独特的景观价值，建筑布局时沿古紫藤周边尽可能的做的很通透，使建筑室内与外部环境相互交融，这样既提升了商业建筑的空间品质，又突出了古紫藤在整个建筑群中的中心地位。

在地块周边东、西、南都有保留建筑，因此建筑群考虑内向性的院落围合式的空间布局，内部的建筑形态与空间感受显得尤为重要。空间既灵活多变，又稳重而不乏现代感。建筑内部，建筑与环境相互交融，形成良好的创新空间，为休闲购物提供更好的空间环境。

5.2关于内外交通组织的考虑

根据城市主要人流流向主要来自时代广场南面的通泗北街,公众人流通过步行街进入紫藤园业街，再进入一个一个围合的院落，楼层之间又通过多部自动扶梯、楼梯相连系。机动车主入口安排在通泗北街上，次入口安排在通泗西街上，沿建筑群周边设环形消防车道，并在入口附近设下地下车库的汽车坡道，使得交通流线清晰明了。

5.3关于内部功能组织的考虑

建筑内部采用院落围合以及竖向分区的方法,地下二层为汽车库、自行车库、货物库房以及设备用房，地下一层为商业用房，地上1--3层为高端品牌的精品商铺、高品质的特色美食以及休闲娱乐。

由于规划要求对建筑高度有限制，设计时将一层商业层高定为4.8米,二层，三层层高定为3.6米，这样的层高设置为商业购物提供良好的空间环境尺度。建筑大部分都采用规整的框架结构柱网，内部采用轻质隔断，或通透的玻璃隔断，可以根据商铺的销售或承租情况灵活的进行分隔。从商业建筑的布局特点，以及考虑到建成后的使用效果，整个建筑采用定风量低速风道送风空调方式避免使用分体式空调对建筑外立面效果的破坏。地下汽车库、地下自行车库、地下商铺等场所，设置机械排烟系统。同时利用下沉式的院落布置，并采取机械补风或自然补风方式，充分解决整个商业建筑群的通风采光问题。

5.4关于建筑形象与外立面的考虑

建筑风格借鉴扬州传统的建筑形式，使得规划建筑与老城区的整体风貌相协调，但在设计过程中，我们通过对现场及周边已有建筑和环境的勘查，发觉与基地一街之隔的时代广场是一种吸收了一些古典元素的现代风格的集中式大型商业建筑，如果我们采用完全的中国传统的建筑风格与形式，可能反而会与周边环境不够协调，因此我们将规划建筑的整体风格定位在现代中式风格上，让传统的建筑符号与元素融入到现代的建筑手法中，让规划建筑传统但又不缺乏现代感。建筑的色彩以灰瓦白墙为主，局部辅以暖色的木质百叶以及深色的型钢线条，形成协调、统一、丰富的城市建筑色彩。并通过虚实对比力求形成一种沉稳有力，具有现代感的中式风格的商业建筑，力图通过建筑来彰显紫藤园商业街的档次与气质。

6.结束语

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目的：通过监测视网膜电流图（ERG）a，b波恢复的百分率，观察单唾液酸神经节苷酯（GM-1）球后注射给药在视网膜缺血再灌注损伤中的保护作用。方法：健康新西兰大耳白兔20只，随机分为实验组和治疗组， 用眼内灌注方法制成视网膜急性缺血的动物模型，治疗组于撤压前5min球后注射GM-1 （1mg/kg），实验组只加压不给药，均记录缺血前ERG，缺血期ERG及再灌注30，60，90min时的ERG图形。 结果：两组缺血前的 a，b波振幅无显著差异（P＞0.05）。a波振幅的恢复在再灌注30，60及90min两组间相比均无显著差异（P＞0.05）。b波振幅的恢复在再灌注30，60及90min两组间相比均有显著性的差异（两组间30，60及90min比较均P ＜0.01），治疗组均高于实验组。 结论：单唾液酸神经节苷酯对视网膜缺血再灌注损伤具有保护作用。

【关键词】 单唾液酸神经节苷酯　视网膜缺血再灌注　视网膜电流图

Protective effects of GM-1 in retinal ischemic injury

Abstract AIM: To detect the recovery of amplitude a-wave and b-wave in reperfusion by using electroretinogram(ERG). The possible mechanism of effect of GM-1 through rerobulbar way in retinal ischemic injury was also observed. METHODS: Twenty Switzerland healthy rabbits with big ears were selected and randomly pided into experimental group and treated group. The rabbit's retinal ischemic model was induced in intraocular pressure by perfusing the normal saline. The treated group was administered with GM-1(1mg/kg) as an intravenous push 5 minutes before the termination of ischemia. The experimental group was no medicine on it but pressure. The wave of ERG of the model eyes in the two groups were recorded respectively before and during ischemia and also at the 30， 60 and 90 minutes of reperfusion. RESULTS: The amplitude of a-wave and b- wave had no significance before ischemia (P >0.05). The a-wave amplitudes in the recovery between the two groups had no significance at 30， 60， and 90 minutes of reperfusion P >0.05). The b-wave amplitudes in the recovery in the treated group were higher than it in the experimental group. CONCLUSION: GM-1 has the protective effects in retinal ischemic injury induced by intraocular hypertension.

· KEYWORDS: GM-1; retina ischemia injury; electroretinogram

0引言

视网膜缺血是临床常见的一种综合征，如青光眼、视网膜中央血管阻塞、糖尿病性视网膜病变等，视网膜缺血性疾病是常见的引起视功能下降的病因。现有的资料认为，损伤的机制主要包括能量缺乏、钙离子超载、自由基的大量产生、兴奋毒性氨基酸的过量释放[1]、各种神经营养因子的缺乏及由此而启动了调控细胞凋亡的基因，使视网膜神经细胞因凋亡致死[2]，从而引起视功能损害。目前对缺血再灌注损伤的药物研究多为全身给药且多作用于单一环节，效果欠理想，我们应用单唾液酸神经节苷酯（GM-1）球后注射局部给药，且对抗缺血再灌注损伤的多个环节，取得了较满意的效果，报告如下。

1材料和方法

1.1材料 华北煤炭医学院动物室提供新西兰大耳白兔，不拘雌雄共20只，内外眼均无异常，质量2.0~2.5kg，眼压1.60~2.27kPa(12~17mmHg)。实验前用卡那霉素眼药水冲洗结膜囊，250g/L乌拉坦沿耳缘静脉注射麻醉（1g/kg），将麻醉的动物固定在自制的实验台上，头部正前方固定，将连接生理盐水瓶输液管的5.5号头皮静脉穿刺针在距角膜缘4mm处垂直巩膜面刺入眼内，固定好穿刺针，抬高生理盐水瓶高度注入生理盐水，使之产生120mmHg的压力，加压持续60min，制成急性高眼压视网膜缺血的动物模型，随机分为实验组和治疗组各10只。

1.2方法 治疗组于撤压前5min球后注射单唾液酸神经节苷酯（GM-1）1mg/kg。实验组只加压，不给药。每组动物分别记录缺血前ERG、缺血期ERG、再灌注30，60，90min时ERG图形。采用德国Rite-port公司视觉电生理诊断系统进行闪光视网膜电流图检查。视觉刺激器为Ganzfeld刺激器，单次闪光持续时间为10μs ，闪光强度0.0dB。作用电极为单电极的角膜接触镜电极，参考电极和地极为自制银针电极。将麻醉固定好的动物暗适应30min，阿托品散瞳记录电极即角膜接触电极置于动物角膜上，参考电极置于两眼连线中点的头皮下，接地电极刺入耳根部。左右眼分别对准Ganzfeld刺激器单眼记录ERG图形。记录方式：所有的动物均记录缺血前ERG，缺血期ERG及再灌注30，60，90min时的ERG图形。ERGa波振幅值从基线水平到a波波峰， b波振幅从a波波峰到b波的峰值。由于动物个体间存在差异性，我们用振幅恢复的百分率来表达a，b波波幅恢复的数值。

2结果

眼内加压时，动物眼球变硬，瞳孔散大，角膜呈雾状混浊。缺血前的 a，b波振幅无显著差异（P＞0.05）。a，b波振幅没有因动物接受GM-1治疗而受到任何影响。在眼内加压10min及结束加压后立即进行ERG记录所得图形均为直线。再灌注30min，实验组a波振幅为（0.847±0.055）μV，治疗组a波振幅为（0.854±0.056）μV，两组相比无显著差异（P＞0.05）。再灌注60min，实验组a波振幅为（0.935±0.047）μV，治疗组a波振幅为（0.946±0.049）μV，无显著差异（P＞0.05）。再灌注90min，实验组a波振幅为（1.017±0.065）μV，治疗组a波振幅为（1.039±0.058）μV，均已恢复并超过100％，无显著差异（P＞0.05）。治疗组b波振幅的恢复在再灌注30min（0.228±0.032）μV、60min（0.403±0.056）μV，90min（0.617±0.057）μV，与实验组再灌注30min（无b波），60min（0.089±0.021）μV，90min（0.135±0.036）μV3个时间段相比均有显著性的增加（P＜0.01）。

3讨论

关于缺血再灌注损伤发生机制的一般过程大多数学者认为是按以下步骤发生的， 1）首先因为缺血缺氧导致细胞内能量短缺，三羧酸循环不能进行，ATP产生减少，ATP的减少使许多跨膜主动转运不能进行，如Na+-K+ATP酶、Ca2+ATP酶等失能使细胞内Na+，Ca2+积聚，而细胞外高K+，Cl-顺电势梯度由细胞外进入细胞内，细胞内Na+，Cl-的潴留又使水分大量内流，造成细胞水肿，甚至坏死；2）Ca2+在细胞内的积聚激活了黄嘌呤氧化酶，降解次黄嘌呤，产生自由基，但量极少；3）兴奋性氨基酸是神经组织中一种常见的神经递质，在缺血过程中可以检测出兴奋性氨基酸的过度释放，释放的机制认为主要是清除机制功能失衡所致，但也有人认为自由基一旦产生就可以直接或间接刺激兴奋性氨基酸的释放，兴奋性氨基酸以谷氨酸和天冬氨酸最为常见，而它们过度释放会产生兴奋毒性，主要通过离子型谷氨酸受体发挥毒性作用；4）由眼内高压引起的视网膜缺血，会因为筛板部分神经轴突受压而引起轴浆流的中断，各种神经营养因子无法逆行转运至神经节细胞，这也是引起神经节细胞死亡的一个原因；5）神经细胞的存活有赖于和周围细胞的关系，一旦神经细胞开始死亡，与其相关联的神经元就不可避免的会或早或晚死亡；6）再灌注阶段，氧气的介入使缺血状态下积聚于线粒体的大量次黄嘌呤和氧气发生反应，产生大量的自由基刺激更多的 兴奋性氨基酸释放。而且这个过程的各个环节互为因果，互相加重，形成一个串式级联反应。

转贴于

视网膜缺血损伤是致盲的一种常见多发因素，如不及时治疗，可造成不可逆性的视力丧失[3，4]。国内外许多眼科学家对这一病变过程进行过大量研究，包括临床诊治和实验性研究，目前仍没有一个较理想的治疗方案。神经节苷脂(gangliosides)是一种含唾液酸的神经鞘糖脂， 它既有脂溶性，又有水溶性，是大多数哺乳动物细胞膜的组成部分，在中枢神经系统中含量丰富。神经节苷脂有两个基本功能:1)介导细胞与经胞，细胞与微生物及细胞与基质间的相互作用；2）调控细胞质膜中蛋白质的功能，如生长因子受体，离子通道等。外源性的神经节苷酯可以通过与细胞表面的神经节苷酯受体结合蛋白，来改变与神经节苷酯相连的激酶活性，从而增加和降低细胞的生长速率。GM-1是单唾液酸四乙糖神经节苷脂，在神经发生，生长及分化中起必不可少的作用[5]。外源性GM-1可以通过血脑屏障进入中枢神经系统并整合到神经细胞膜发挥作用[6]，它由一个疏水的神经酰胺和一个亲水的糖链组成，在4个糖基的第二位上带有一分子的唾液酸，其疏水的神经酰胺部分插入细胞膜脂质双层的外层，亲水的糖链部分暴露在细胞膜表面，这种分布使其易于细胞外的信息发生相互反应，影响细胞膜活动而发挥其生物学功能。另外，细胞膜神经节苷脂类物质浓度随其极性基因的动态作用，钙离子浓度及细胞表面糖蛋白的含量变化而变化引起，细胞膜局部结构改变而影响膜表面糖蛋白和嵌入蛋白。所以目前认为神经节苷脂类物质对神经细胞外信息传递具有重要意义[7]。

ERGa波主要起源于光感受器细胞，对缺血性损伤的耐受性较强，b波主要起源于视网膜内层的双极细胞和Mül ler细胞，是视网膜缺血的灵敏指标。本实验显示：所有动物在眼内加压10min后立即进行ERG记录所得图形均为直线，提示视网膜神经元对缺血损伤非常敏感，导致这种结果的原因可能有两种： 1）缺血的直接影响；2）缺血过程中释放的兴奋性氨基酸、自由基及细胞内钙离子超载等因素的影响。GM-1增加了视网膜缺血60min后a，b波振幅的恢复，再灌注60min时实验组和治疗组a波振幅的恢复均达到了缺血前的基线值，而b波只有部分程度的恢复，a波恢复较灵敏，b波恢复缓慢、不完全这种现象在国外许多急性视网膜缺血的动物模型中也被观察到，这与视网膜内、外层血供的解剖关系有关。近年来研究表明，外源性GM-1插入到细胞膜中可加强神经细胞对神经营养因子的反应，GM-1本身还有神经营养作用，神经节苷脂可挽救去除营养物质的神经细胞。GM-1对中枢神经系统损伤具有明显的修复作用，其作用途径如下：1）直接嵌入受损神经细胞膜补充缺损，保持细胞膜的完整性[8]；2）维持细胞膜上Na+-K+ATP酶和Ca2+-Mg2+ATP酶的活性[9，10]；3）抑制病理性脂质过氧化反应，阻断兴奋性氨基酸对相关离子的正常转运过程；4）防止乳酸性酸中毒，对多种神经生长因子有促进作用，对多种炎性因子及细胞因子表达起调控作用，对神经细胞凋亡起阻断作用[11，12]。我们不仅应用GM-1对抗视网膜缺血再灌注损伤的多个环节，而且用药方式进行改进，球后注射局部给药不仅减少用药剂量、增强疗效并且减少了全身给药的不良反应，取得了较好的效果。

参考文献

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篇4

关键词：乌饭树；提取物；视网膜；光损伤

The protective effect of Vaccinium Bracteatum Thunb leaves　and the extract against light injury of retina

Wang Li， Zhang Xuetong， Yao Huiyuan

(School of Food Science and Technology， Southern Yangtze University， Wuxi 214036;Department of Ophthalmology of the Wuxi No.4 Peoples Hospital， Wuxi 214036， China)

ABSTRACT: Objective To investigate the protective effect of the extract of Vaccinium Bracteatum Thunb (VBT) leaves against light injury of retina. Methods 20 Newzealand rabbits were pided into 4 groups: the normal control group， modelⅠgroup， modelⅡ group， and model Ⅲ group. The normal control group ate and drank freely. modelⅠgroup ate and drank freely but took in 50g/(kg・d) fresh VBT leaves daily for 4 weeks. model Ⅱgroup ate and drank freely， but took in 50g/(kg・d) old VBT leaves daily for 4 weeks. model Ⅲ group ate freely， but took in 50mg/(kg・d) extract of VBT leaves(resolved in water) daily for 4 weeks. All rabbits were exposed to strong light， meanwhile， the retinas were analyzed by electroretinogram (ERG) every week. Finally， all the rabbits were killed and the content of MDA and SOD in the retina were detected. Results In the control group， the latency time of the B wave increased and the amplitude of the B wave shortened， while in the model Ⅰ，Ⅱ and Ⅲ groups， the changes of B wave just opposite. The content of MDA in the model Ⅰ，Ⅱ， and Ⅲ groups was lower than that in the control group(P

KEY WORDS: Vaccinium Bracteatum Thunb(VBT); extract; retina; light injury

乌饭树是杜鹃花科的一种植物，我国南北各地均产，很多中药类书籍中都记载其对人体具有保健作用[12]。国外对乌饭树同种属植物的果实进行研究发现，其对多种眼科疾病均有很好的治疗效果，目前很多国家都已经把乌饭树紫黑浆果中提取出的色素类物质用于眼科医疗领域。意大利、法国、西班牙、韩国、美国以及新西兰等国家已经将其应用于夜盲症、毛细管脆弱、脑血管障碍、胃溃疡的治疗[34]。本研究采用强光刺激损伤白兔视网膜，同时喂食乌饭树树叶或其提取物，利用视网膜电图技术(electroretinogram， ERG)对白兔视网膜进行研究，然后对视网膜进行丙二醛(MDA)和超氧化物岐化酶(SOD)含量分析，最后对其保护机理进行了初步的探讨。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 新西兰大白兔20只，购自江南实验动物场，体重(2.5±0.5)kg。

1.1.2 药品与试剂 乌饭树树叶，购自于江苏溧阳；乌饭树树叶提取物，实验室自制；美多丽眼液，参天制药株氏会社(日)；倍诺喜眼液，参天制药株氏会社(日)；总蛋白含量测试盒，购自于南京建成生物研究所； MDA含量测定试剂盒，购自于南京建成生物研究所； SOD活力测定试剂盒，购自于南京建成生物研究所；PBS(磷酸盐缓冲液)：800mL蒸馏水中溶解8g氯化钠，0.2g氯化钾，1.44g磷酸氢二钠和0.24g磷酸二氢钾，用盐酸调节pH至7.4，加水定容至1L，在1.034×105Pa高压下杀菌20min，保存于室温。

1.1.3 主要仪器 全视野闪光刺激器，重庆医用电子仪器厂；视觉电生理检查与诊断系统VETSⅢB，重庆医用电子仪器厂。

1.2 方法 20只新西兰大白兔适应性喂养1周，自由摄取饲料，自由饮水。然后用1000W强光照射，刺激眼睛视网膜产生光损伤，同时按照不同的组别进行喂养食物，每周进行ERG的测量。具体分组如下：正常对照组：自由摄取饲料，自由饮水。模型对照Ⅰ组：自由摄取饲料，自由饮水，另外每天喂乌饭树新鲜树叶，按照50g/(kg・d)剂量喂养，连续4周。模型对照Ⅱ组：自由摄取资料，自由饮水，另外每天喂乌饭树陈树叶，按照50g/(kg・d)剂量喂养，连续4周。模型对照Ⅲ组：自由摄取饲料，另外每天喂乌饭树树叶提取物(溶解于饮水中)，按照50mg/(kg・d)剂量喂养，连续4周。

1.2.1 ERG的测量 记录电极为角膜式接触电极，参考电极和接地电极为普通电极。预先用剪刀剪去白兔额部毛，再用剃须刀刮干净。进行ERG测量操作前先用美多丽眼液对白兔进行扩瞳，暗适应30min，眼角膜用倍诺喜进行麻醉。分别利用蓝光、白光和红光对白兔视网膜进行刺激(在白光刺激后明适应30min再进行红光刺激测定)。记录电极置于兔子眼角膜表面，参考电极置于靠近兔子额部，用胶布固定，接地电极置于兔子耳朵上，用胶布固定。测量时，兔子头部置于刺激球中央，对单只眼睛视网膜进行刺激。刺激条件：高频85Hz，低频0.1Hz，刺激光亮度1.5Log，单次刺激。记录仪进行同步记录，经过仪器分析得到B波的延滞时间(以ms为单位)和振幅(以μV为单位)，进行分析。

1.2.2 视网膜匀浆的制备 于实验30d后将白兔处死，摘除眼球，仔细去除眼内容物，剥离视网膜，置于冰冷的玻璃匀浆器中，冰浴下碾磨5min，制成匀浆，10000r/min高速离心15min，取上清液待用。

1.2.3 总蛋白含量的测定 蛋白质上的氨基(-NH3+)与考马斯亮兰染料上的阴离子结合，能够使溶液从棕红色变为蓝色，通过测定吸光度值可以计算出其中的蛋白质含量。取组织匀浆50μL，按照试剂盒配制试剂，并且进行测量。

1.2.4 MDA的测定 过氧化脂质的分解产物-MDA与硫代巴比妥酸作用后形成红色物质，利用分光光度计测定吸光度，可以计算出其中的丙二醛含量。按照试剂盒配制试剂，并且进行测量。

1.2.5 总超氧化物岐化酶(TSOD)活力的测定 通过黄嘌呤以及黄嘌呤氧化酶反应体系产生超氧阴离子自由基[O-2・]，氧化羟胺形成亚硝酸盐，在显色剂的作用下呈现紫红色，当样品体系中含有SOD时，则对[O-2・]有专一性的抑制作用，使形成的亚硝酸盐减少，比色时测定管的吸光度值要低于对照管的吸光度，通过计算可以得出视网膜中SOD的活力。按照试剂盒配制试剂并且测量。

2 结果

2.1 ERG测定结果 ERG分别由PⅠ、PⅡ和PⅢ三个导程构成，B波是ERG中属于其中的PⅡ导程部分，紧随A波后的一个正相波。它起源于光感受器与神经节细胞之间的神经通路中的一种光兴奋活动，可能来自双极细胞或Müller细胞。它反映视网膜内核层区域细胞的电活动，并且反应非常迅速，受外界因素的影响较为明显，如缺氧、温度变化以及不同的光刺激等，因此B波作为评价视网膜功能可靠而灵敏的客观指标之一，近年来越来越受到重视。在本研究中测定白兔在受强光刺激后暗视ERG、暗反应最大波和明视ERG中B波的变化。在实验中采用三种光(蓝光、白光、红光)对白兔视网膜进行刺激，其中蓝光测定值代表的是暗视ERG，白光测定值代表的是暗反应最大波，而红光测定值代表的是明视ERG。具体结果见表1-3。

2.2 白兔眼睛视网膜抗氧化指标的检测结果 实验30d后，将白兔的视网膜取出，进行适当的处理，测定其中的MDA和TSOD含量，前者可以反映视网膜脂质过氧化的程度，而后者则反映其中抗氧化酶体系活力的变化。具体结果见表4。

表1 白兔暗适应ERG――B波的潜伏期及振幅的变化（略）

Table 1 The change of the latency time and the amplitude of the B wave of the dark adaptation ERG of the rabbits

Model Ⅰ：fed with fresh leaves; Model Ⅱ: fed with leaves stored for one year; Model Ⅲ: fed with the extracts from leaves

*P

表2 白兔暗反应最大波――B波的潜伏期及振幅的变化（略）

Table 2 The change of the latency time and the amplitude of the B wave of the scotopic threshold response of the rabbits

Model Ⅰ：fed with fresh leaves ; Model Ⅱ:fed with leaves stored for one year; Model Ⅲ:fed with the extracts from leaves

*P

表3 白兔明视ERG――B波的潜伏期及振幅的变化（略）

Table 3 The change of the latency time and the amplitude of the B wave of the photopic ERG of the rabbits

Model Ⅰ: fed with fresh leaves; Model Ⅱ:fed with leaves stored for one year; Model Ⅲ: fed with the extracts from leaves

*P

表4 不同实验组别白兔眼睛视网膜抗氧化酶体系的检测结果（略）

Table 4 The contents of the MDA and SOD in the retina of different groups

Model Ⅰ: fed with fresh leaves; Model Ⅱ: fed with leaves stored for one year; Model Ⅲ: fed with the extracts from leaves

*P

3 讨论

从表1-3中可以看出，随着实验时间的延长，对照组B波的潜伏期逐渐延长，而模型组(Ⅰ-Ⅲ)则都在一定程度上有所降低，而B波振幅的变化趋势正好相反。

由于视杆细胞对蓝光敏感，因此暗视蓝光ERG主要反映的是眼睛视网膜中视杆细胞的变化。从表1中的变化趋势可以看出，乌饭树树叶和其提取物对视杆细胞具有明显的改善作用。

视锥细胞对红光敏感，所以明视ERG主要反映的是眼睛视网膜中视锥细胞的变化。从表2中的变化趋势可以看出，乌饭树树叶和其提取物对视锥细胞同样具有明显的改善作用。

暗反应最大波是视网膜明视系统和暗视系统的混合反映，其中的B波是视杆细胞兴奋后产生的电位变化，可能起源于Müller细胞或双极细胞。其反映视网膜内核层区域细胞的电活动，取决于视网膜内信号传递过程的完整性[5]。从表3可以看出，乌饭树树叶和其提取物对于视网膜的视觉系统有很强的维护作用。

从表1-3还可以看出新鲜树叶和陈树叶对于视网膜的保护作用基本一致，说明在新鲜树叶储藏期间没有功能性物质的损失，或者是损失很少，这样也就可以为原料的储藏提供了一些依据。

MDA是脂质过氧化的产物，通常被用来衡量脂质过氧化的程度。视网膜的视细胞外节主要是盘膜结构，内含丰富的长链多不饱和脂肪酸，在受到光的作用后，易从位于两个双键之间的亚甲基上脱去氢原子，形成质子自由基，然后发生双键和未配对电子位置的转移，形成较稳定的共轭双键，再与氧反应，形成质子自由基和质子过氧化物。这些自由基再攻击其他不饱和脂肪酸，引起连锁反应，从而使盘膜以及线粒体膜和内质网膜的脂类受到损害。

环境光的损伤被认为是一种光化学损伤。感光器外段富含长链不饱和脂肪酸，内段富含线粒体，对氧的需求大，当光子被视紫红质吸收后可产生一系列的自由基，它们与感光器和视网膜色素上皮(RPE)中的不饱和脂肪酸发生反应，发生脂质过氧化反应，引起眼睛组织破坏。从表4中可以看出，对照组的白兔眼睛视网膜中MDA的量大大超过正常白兔眼睛视网膜中的量[6]，说明实验中的强光刺激对白兔眼睛有了很严重的损伤；而模型组Ⅰ-Ⅲ的白兔视网膜中的MDA含量接近于正常白兔眼睛视网膜中的量，说明白兔食用乌饭树树叶或树叶提取物后，视网膜内部的脂质过氧化得到了有效的抑制。其主要原因应该是由于乌饭树树叶含有丰富的黄酮类物质[4]，黄酮类物质具有很强的清除自由基能力，而视网膜光化学损伤的主要发病机制是脂质体过氧化[7]，所以在实验中服用乌饭树树叶或其提取物的白兔视网膜受到很好的保护。

视细胞中含有大量的线粒体，其中的呼吸链在进行电子传递时可产生自由基，如辅酶Q是醌类化合物，通过氧化还原可生成半醌自由基。视细胞中的视黄醛或视黄醇受可见光照时也可产生自由基。许多研究表明，视网膜的光损伤是光照激发产生自由基，引起组织发生过氧化的结果。在正常情况下，机体内自由基的产生与清除过程处于动态平衡，在遭受各种外界因素的影响时，平衡被破坏，机体受损。视网膜本身具有一定的抗氧化能力，在一定程度上可以预防光化学损伤。它各层均存在清除自由基的天然保护系统，包括抗过氧化物酶和自然抗氧化剂[8]，它们可以通过各种化学反应而终止自由基链反应，达到清除有害自由基，防止组织破坏的目的。从表4可以看出，对照组白兔眼睛视网膜中SOD要远低于其他3个模型组，说明乌饭树树叶以及其提取物能够有效地保护视网膜中的SOD，使其能够保持活性。视网膜抗氧化能力下降时，容易受到光的损伤，反之在受到光的刺激损伤后，视网膜中的抗氧化酶体系必定发生变化。从表4可以看出，对照组的白兔眼睛视网膜中SOD的量大大低于正常白兔眼睛视网膜中的量[6]。有实验表明，光照可以使细胞内SOD水平下降[9]，而SOD是生物体内自由基清除剂之一，可以促进超氧化物阴离子自由基的岐化反应。在本研究中可能的机理是乌饭树树叶及其提取物能够将超氧阴离子自由基[O-2・]转变为O2和H2O，清除其毒性作用，减轻和防止过氧化，从而达到保护视网膜的作用。同时，从表4可以得出结论，新鲜树叶和陈树叶可以达到基本一致的效果。

综上所述，乌饭树是一种很丰富的天然资源，其功能在很多中药典籍中都有记载，但是目前的应用不是很广泛，原因是人们对它的功能和具体的作用机理不了解。本研究发现乌饭树树叶或其提取物能够有效地预防保护视网膜免受光损伤，服用50g/(kg・d)的乌饭树树叶或者50mg/(kg・d)的提取物，可以起到明显的效果。

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